乳糖含量微量法/48样产品简介:乳糖在β-半乳糖苷酶作用下分解成半乳糖和葡萄糖,葡萄糖被特异性酶氧化产生与显色剂反应的(粉)红色产物 ,该产物在 510nm 处有最大吸收峰 ,通过校正游离的葡萄糖背景值进而得到乳糖含量。
试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液 A1
粉体 mg× 1 支
4℃保存
加 3mL 的蒸馏水充分溶解备用。
提取液 A2
试剂一
粉剂 mg× 1 支
-20℃保存
加 0.6mL 蒸馏水混匀。
试剂二
粉剂 mg× 1 瓶
试剂三
液体 8mL× 1 瓶
试剂四
液体 14mL× 1 瓶
临用前加 7mL 试剂三混匀备用
试剂五
加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
标准品
加 2mL 蒸馏水溶解即 5mg/mL 的葡萄糖,再稀释 10 倍成 0.5mg/mL 备用测定。
所需仪器和用品:酶标仪、96 孔板、天平、移液器、研钵、离心机、蒸馏水。乳糖含量检测:
一、样本制备:
1、组织样本 :0.1g 组织样本(水分充足的样本建议取 0.2g 左右),加 1mL 的蒸馏水研磨,粗提液全部转移到 EP 管中,12000rpm,常温离心 10min,上清液待测。
2、液体样品 :近似中性的澄清液体样本可直接检测; 若为酸性样本则需先用NaOH(2M)调 PH 值约 7.4 ,然后室温静置 30min ,取澄清液体直接检测。
3、高蛋白含量组织样本:称取约 0.1g 样本(水分充足的样本建议取 0.2g 左右),加 0.9mL 的蒸馏水研磨 ,粗提液全部转移到 EP 管中,加入 0.05mL 提取液 A1 ,混匀后加入 0.05mL 提取液 A2 ,混匀 ,用蒸馏水定容到 1mL ,室温静置 30min ,若有脂肪除去上层脂肪, 12000rpm 室温离心 10min ,取澄清的液体检测。
二、上机检测:
1、 酶标仪预热 30min ,设置温度在 25℃ , 设定波长到 510nm。
2、 所有试剂解冻至室温(25℃) 。
3、 实验前选取几个样本做预测定 ,若待检测指标含量较高可通过用蒸馏水稀释找出适合本次检测样本的稀释倍数 D。
注 意:正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定
上海酶联生物科技有限公司
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