猪蓝耳病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 猪蓝耳病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV) Dye-based Quantitative Real-time RT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR2647 |
产品概述
本试剂盒基于实时荧光定量PCR技术，用于定性检测高致病性及经典株猪蓝耳病毒（PRRSV）的核酸。通过特异性引物和探针设计，靶向病毒基因组保守区域，结合荧光信号实时监测，实现对病原体的快速、精准检测，适用于临床诊断、流行病学调查及疗效评估。
检验原理
采用TaqMan探针法，通过逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增目标核酸序列。反应体系中，荧光探针与靶基因结合后释放信号，由荧光定量PCR仪动态监测扩增曲线，通过阈值循环数（Ct值）判定结果。
试剂盒组成
规格：25T/盒或50T/盒
| 组分 | 25T/盒规格 | 50T/盒规格 |
| RT-PCR反应液 | 437.5 μL/管（或500 μL） | 875 μL/管（或500 μL×2） |
| 混合酶液 | 62.5 μL/管（或25 μL） | 125 μL/管（或50 μL） |
| 阳性对照 | 40 μL/管（或250 μL） | 40 μL/管（或250 μL） |
| 阴性对照（灭菌纯水）| 40 μL/管（或250 μL） | 40 μL/管（或250 μL） |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
注：
阳性对照为含PRRSV靶基因的质粒。
不同批号组分不可混用。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括但不限于：
ABI 7500、Bio-Rad系列
安捷伦MX3000P/3005P、Roche LightCycler
杭州博日系列、Cepheid SmartCycler
储存条件与有效期
储存：避光保存于-20℃以下，避免反复冻融。
有效期：12个月。
操作步骤
样本处理
使用磁珠法或离心柱法提取核酸，按提取试剂说明书操作。
试剂配制
反应体系配置（以单反应为例）：
RT-PCR反应液：17.5 μL
混合酶液：2.5 μL
模板RNA：5 μL
总反应体积：25 μL/管。
PCR扩增程序
逆转录：50℃ 15分钟
预变性：95℃ 3分钟
扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 45秒（采集荧光信号）
结果判读
阳性：Ct值≤35且有明显扩增曲线。
阴性：无扩增曲线或Ct值＞38。
注意事项
实验分区操作（样本处理区、试剂准备区、扩增区），避免污染。
试剂解冻后需充分混匀，离心后使用。
若检测样本为强阳性，建议稀释后复测。
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