近平滑念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 近平滑念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Candida parapsilosis Dye-based Quantitative Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR2660 |
产品概述
本试剂盒采用SYBR Green I染料法荧光定量PCR技术，专用于检测近平滑念珠菌（Candida parapsilosis）的核酸。通过优化引物体系和反应条件，可实现高灵敏度、高特异性的定量检测，适用于临床样本、环境样本及科研中的核酸分析。
试剂盒组分
2×荧光PCR预混液：含SYBR Green I染料、dNTPs、耐热DNA聚合酶及优化缓冲体系。
阳性对照：预稀释的近平滑念珠菌DNA片段（10^8拷贝/μL），需按说明书进一步稀释。
阴性对照：无核酸酶水。
模板稀释液：用于标准品梯度制备。
注：具体组分以实际包装清单为准。
操作步骤
标准品稀释（以10^2-10^7拷贝/μL梯度为例）：
标记6管，分别加入45 μL模板稀释液。
取5 μL阳性对照（10^8拷贝/μL）加入第1管，震荡混匀得10^7拷贝/μL标准品，依次稀释至10^2拷贝/μL。
稀释需在独立区域操作，避免交叉污染。
PCR反应体系配制（20 μL体系）：
2×预混液：10 μL
引物混合液：2 μL
模板DNA：2 μL
无核酸酶水：补至20 μL
扩增程序：
预变性：95℃ 3分钟
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）
熔解曲线分析：60℃至95℃，每0.5℃递增。
性能参数
灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的靶标DNA。
特异性：不与其他念珠菌属或常见微生物DNA交叉反应。
重复性：CV值≤5%（高、中、低浓度模板）。
线性范围：10^2-10^7拷贝/μL（R²≥0.99）。
注意事项
实验需在分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区）内完成，避免气溶胶污染。
阳性对照含非感染性DNA片段，但仍需按生物安全规范处理。
熔解曲线需呈现单一峰值，否则提示非特异性扩增。
储存与有效期
未开封试剂盒：-20℃避光保存，有效期12个月。
开封后预混液：4℃保存不超过1个月，避免反复冻融。
应用范围
适用于科研用途，不用于临床诊断。
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