大豆拟茎点种腐病菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 大豆拟茎点种腐病菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Phomopsis longicolla Dye-Based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR2686 |
技术原理
本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，通过SYBR Green等荧光染料与双链DNA结合的特性，实时监测PCR扩增过程中荧光信号的累积。通过分析扩增曲线和Ct值（阈值循环数），实现对目标病原菌DNA的定性和定量检测。
产品特点
即开即用：预混优化反应体系，用户仅需提供模板DNA即可进行实验。
高灵敏度：引物经特异性优化，可检测低至10拷贝/μL的病原菌DNA。
快速高效：全程耗时约1.5小时，显著快于传统培养或形态学鉴定方法。
稳定性强：批内与批间重复性误差≤5%，适用于高通量检测需求。
操作流程
样本制备：
使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从大豆种子/植株组织中提取基因组DNA。
建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反应体系配制（20 μL体系示例）：
预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特异性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
补充无核酸酶水至终体积。
PCR扩增程序：
预变性：95℃ 5分钟；
循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；
熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。
结果判读：
阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；
可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。
注意事项
避免反复冻融试剂，分装后使用。
实验需在无菌环境下操作，防止交叉污染。
阳性对照建议与待测样本同步检测，以排除假阴性。
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