新型布尼亚病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 新型布尼亚病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Novel Bunyavirus Dye-based Quantitative Real-time RT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR2693 |
产品概述
本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术，针对新型布尼亚病毒（如发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒SFTSV、布尼亚维拉病毒等）的保守基因序列设计特异性引物及探针，实现对病毒RNA的高灵敏度、高特异性检测。适用于科研实验中对可疑样本的病原学分析，不用于临床诊断。
检验原理
通过一步法荧光RT-PCR技术，将病毒RNA逆转录为cDNA后进行扩增，荧光信号与扩增产物同步累积，通过定量分析仪检测循环阈值（Ct值），判定样本中病毒载量。
试剂组成
反应液：含缓冲液、dNTPs、荧光染料等（500μL×2管）
酶混合液：逆转录酶、Taq DNA聚合酶（50μL×1管）
阳性质控品：已知浓度病毒RNA片段（50μL×1管）
阴性质控品：无RNA酶水（250μL×1管）
注：不同批号试剂禁止混用，组分可满足50次检测（20μL/反应体系）。
储存及有效期
储存条件：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（≤5次）。
有效期：12个月（以包装标注为准）。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括：
ABI 7500/QuantStudio系列
安捷伦MX3000P/3005P
Roche LightCycler
Bio-Rad CFX系列
Eppendorf Mastercycler系列
样本要求
样本类型：动物组织（心、肝、脾等）、全血、血清或病毒培养物。
采集与保存：
组织样本：2g，-70℃长期保存（≤6个月）；
液体样本：2mL，短期-20℃保存，运输需2~8℃冰袋。
预处理：需按标准方法提取RNA，建议使用商业RNA提取试剂盒。
操作步骤
试剂准备：
反应液与酶液按比例混合，分装至PCR管。
阳性对照需梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），避免污染。
加样：每反应体系加入5μL模板RNA（或对照品）。
PCR程序设置：
逆转录：50℃ 15分钟
预变性：95℃ 3分钟
扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，荧光采集）
结果判读
阳性：Ct值≤35，且扩增曲线呈S型；
阴性：无Ct值或Ct值＞38；
可疑：35＜Ct值≤38，建议重复检测。
注意事项
实验需在PCR洁净区进行，严格分区操作（试剂准备、样本处理、扩增区）。
避免试剂反复冻融，解冻后需彻底混匀并离心。
废弃物质需按生物危害品处理。
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