产品介绍：
产品名称 | 小鼠激活蛋白C(APC)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Mouse APC ELISA Kit |
规格 | 48T/96T | 货号 | A106552 |
检测方法：双抗体夹心法
规格：48T/96T
检测范围：根据供应商不同，一般为15.625-1000 pg/ml或类似范围
灵敏度：通常为9.375 pg/ml或更高
种属反应性：小鼠
试剂盒组成
预包被微孔板：96孔或48孔塑料板，孔内已预先包被捕获抗体。
酶标二抗：HRP标记的检测抗体。
标准品：已知浓度的APC系列梯度溶液，用于绘制标准曲线。
样品稀释液：用于稀释样本，减少非特异性干扰。
洗涤缓冲液：含吐温-20的磷酸盐缓冲液，用于洗去未结合物质。
底物溶液：TMB（四甲基联苯胺），用于显色反应。
终止液：稀硫酸溶液，终止酶促反应。
板封膜：防止蒸发和污染。
说明书：详细的操作步骤、注意事项等。
检测原理
双抗体夹心法：将捕获抗体包被在微孔板上，加入样本或标准品，使APC与捕获抗体结合。随后加入酶标检测抗体，形成“抗体-APC-酶标抗体”复合物。加入底物溶液后，酶催化底物显色，颜色深浅与APC浓度正相关。
适用样本
血清、血浆、细胞培养上清液、细胞裂解液、组织裂解液等。
操作步骤
标准品稀释：按说明书稀释标准品，制备不同浓度梯度。
加样：设空白孔、标准品孔和待测样品孔，加入相应液体。
温育：封板后37℃温育30分钟。
洗涤：弃去液体，用洗涤缓冲液洗涤5次，拍干。
加酶：加入酶标试剂，避光温育。
显色：加入显色剂A、B，避光显色15分钟。
终止：加入终止液，终止反应。
测定：酶标仪450nm波长下测定OD值。
注意事项
试剂盒保存：2-8℃保存，6个月内有效。
样本处理：避免溶血和反复冻融，确保样本清澈透明。
操作规范：使用校准准确的移液器，避免交叉污染。
结果判定：以标准曲线计算样品浓度，注意稀释倍数。
产品优势
高灵敏度与特异性：采用高度特异的抗体，避免交叉反应。
严格质检：通过回收率测试和线性稀释实验，确保数据精确。
重复性好：严格控制批间、批内差，保证结果可重复。
操作简便：预包被微孔板，即开即用，节省时间。
安全环保：不含有毒物质，安全无害。
试剂与样本准备阶段：
温度平衡（最容易被忽视的点）
操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。
后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。
样本处理
避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。
离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
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