猪传染性胃肠炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

猪传染性胃肠炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术，专用于猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）的定性及定量检测。通过特异性引物和荧光染料（如SYBR Green I）与病毒RNA结合，实时监测扩增信号，具有高灵敏度、高特异性及宽线性范围的特点，适用于科研用途。

组成与保存条件

试剂组分：包括RT-PCR反应液、酶混合物、阳性对照（无传染性DNA片段）、阴性对照及模板稀释液。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤3次）。荧光染料需避光操作，其吸收光谱为471 nm（游离状态）及500 nm（结合DNA状态），发射光谱为530 nm。

检测原理

RNA提取：需使用配套或经验证的RNA提取试剂。

反转录与扩增：通过一步法RT-PCR，病毒RNA经反转录为cDNA后，通过特异性引物扩增，荧光染料嵌入双链DNA产生信号。

数据分析：

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算待测样本浓度。

定性检测：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30；样本Ct≤35判为阳性，≥40为阴性，35-40需复测确认。

操作步骤

标准品稀释：按10倍梯度稀释阳性对照（建议范围10²~10⁷拷贝/μL），独立区域操作以避免污染。

反应体系配制：每20 μL反应体系包含10 μL预混液、0.5 μL酶、1 μL引物探针混合液、2 μL模板及6.5 μL无核酸酶水。

PCR程序设置：

反转录：50℃ 15分钟；

预变性：95℃ 3分钟；

扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，信号采集步骤）。

注意事项

防污染措施：分区分装操作，使用带滤芯枪头及一次性防护用品。

质量控制：

避免试剂反复冻融或光照；

扩增曲线需呈现典型“S”形，否则需排查模板或试剂问题。

局限性：

病毒变异或提取效率差异可能导致假阴性；

运输保存不当或操作误差可能影响定量准确性。

安全与废弃物处理

实验后所有材料需按生物危害废物处理，工作台用10%次氯酸或75%乙醇消毒。

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