产品介绍:
产品组成
酶标包被板:预包被抗COX2抗体的微孔板。
标准品:已知浓度的COX2蛋白,用于绘制标准曲线。
生物素化抗体:与COX2结合的标记抗体。
酶结合物:与生物素化抗体反应的酶标试剂。
显色液:含TMB的显色液A和B液,用于颜色显色。
终止液:终止显色反应的试剂。
洗涤液:用于洗涤反应板的浓缩液。
产品名称
小鼠细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ(COX2)ELISA试剂盒
英文名称
Mouse COX2 ELISA Kit
规格
48T/96T
货号
A115996
检测原理
采用双抗体夹心法。微孔板包被抗COX2抗体,加入样本后,COX2与生物素化抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。加入TMB显色液,酶催化显色反应,颜色深浅与COX2浓度成正比,通过酶标仪测定吸光度,计算浓度。
检测步骤
加样:标准品和样本加入微孔板,反应后洗板。
加酶标抗体:加入生物素化抗体,反应后洗板。
加酶结合物:加入酶标试剂,反应后洗板。
显色:加入显色液,避光反应。
终止:加入终止液,终止反应。
测定:酶标仪在450nm波长下测定吸光度。
性能参数
检测范围:通常为0.313-20ng/mL。
灵敏度:可检测低浓度的COX。
特异性:对COX2有高度特异性,无交叉反应。
重复性:板内和板间变异系数均小于10%。
注意事项
样本处理:血清、血浆等样本需离心处理,避免溶血。
试剂准备:洗涤液需稀释,生物素化抗体需当日配制。
操作规范:严格按照说明书操作,避免交叉污染。
结果解读:需绘制标准曲线,计算样品浓度。
试剂与样本准备阶段:
温度平衡(最容易被忽视的点)
操作: 从冰箱取出的试剂盒(包括标准品、酶标试剂、样品等)必须在室温(18-25℃)下平衡 30 分钟。
后果: 冷试剂直接使用会导致孔内温差,产生冷凝水或非特异性背景,严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液: 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配: 酶标试剂和显色液(如 TMB)对光和热敏感,建议在使用前配制工作液,避免失效。
样本处理
避免溶血: 血清样本如果发生溶血(红细胞破裂),会释放过氧化物酶,导致假阳性或背景过高。
离心去杂质: 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心,去除沉淀和悬浮物,防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数: 如果样本浓度过高,超出标准曲线范围,必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
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