产品概述

本试剂盒采用SYBR Green I 荧光染料法,通过实时荧光定量PCR技术特异性检测猪囊尾蚴(Cysticercus cellulosae)线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(COX1)基因片段。适用于猪肉组织、血液、脑脊液等样本中猪囊尾蚴DNA的定性/定量分析,灵敏度高、特异性强,为囊尾蚴病诊断和流行病学监测提供可靠工具。
产品名称 | 猪囊尾蚴染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Cysticercus cellulosae Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3700 |

检测原理

DNA提取:样本中基因组DNA经裂解、纯化获得模板。
qPCR扩增:
特异性引物靶向猪囊尾蚴COX1基因保守区域。
SYBR Green I 染料嵌入双链DNA,在激发光下发射荧光信号。
荧光强度与PCR产物量成正比,通过循环阈值(Ct值)定量初始DNA浓度。
熔解曲线分析:验证扩增产物特异性(单一峰形)。
试剂盒组分

| 组分名称 | 48T用量 | 保存条件 |
| 2× SYBR Green qPCR Master Mix | 600 μL | -20℃ |
| 猪囊尾蚴引物混合液(干粉/液) | 48 μL | -20℃ |
| DNA提取试剂盒(裂解液+纯化柱) | 1套 | 室温 |
| 阳性对照(猪囊尾蚴DNA) | 50 μL | -20℃ |
| 阴性对照(无核酸水) | 1 mL | -20℃ |
| RNase-Free Water | 1 mL | 室温 |
操作步骤

1. 样本DNA提取
参照配套DNA提取试剂盒说明书操作,最终用50 μL洗脱液溶解DNA。
2. qPCR反应体系配制
| 组分 | 单反应体积 |
| 2× SYBR Green Master Mix | 10 μL |
| 引物混合液 | 0.8 μL |
| DNA模板 | 2 μL |
| RNase-Free Water | 7.2 μL |
| 总体积 | 20 μL |
注意:每样本设3复孔,同时设置阳性/阴性对照。
3. qPCR程序设置
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 | - |
| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 | - |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | 40 | YES |
| 熔解曲线 | 60℃→95℃ | 0.5℃/sec | 1 | 连续采集 |
结果判读
阴性对照:Ct值≥40或无扩增曲线。
阳性对照:Ct值≤35且熔解曲线为单峰。
样本判定:
阳性:Ct值≤38,熔解曲线峰与阳性对照一致。
可疑:Ct值38-40,建议重复检测。
阴性:无Ct值或Ct值>40。
定量分析:通过标准品曲线计算拷贝数(需另行构建质粒标准品)。
性能参数

灵敏度:最低检出限10 copies/μL
特异性:不与猪带绦虫成虫、细粒棘球绦虫、旋毛虫等交叉反应
重复性:批内/批间变异系数(CV)< 5%
注意事项

实验分区操作(样本处理区、PCR配制区、扩增区),避免气溶胶污染。
熔解曲线出现多峰提示引物二聚体或非特异扩增,需优化条件。
若样本为组织,需充分匀浆确保DNA释放。
本试剂盒仅限科研使用,临床诊断需经当地法规批准。
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关键字: 猪囊尾蚴;染料法荧光定量;PCR试剂盒;
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