产品介绍:

大鼠基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA试剂盒是一种用于定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液及其他生物体液中TIMP-2浓度的实验工具,广泛应用于科研领域,不用于临床诊断。该试剂盒基于双抗体夹心法的原理,具有高灵敏度、高特异性和良好的重复性,能够准确反映样本中TIMP-2的含量。
产品名称 | 大鼠基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Rat TIMP-2 ELISA Kit |
规格 | 48T/96T | 货号 | A107945 |
核心原理与操作流程
实验原理:采用双抗体一步夹心法。用纯化的抗TIMP-2抗体包被微孔板,形成固相抗体,加入待测样本和HRP标记的检测抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经洗涤后加入底物TMB显色。颜色深浅与样本中TIMP-2浓度呈正相关,通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算浓度。

主要步骤:
加样:设置标准孔、样品孔和对照孔,加入标准品或待测样品。
温育与洗涤:使用封板膜封闭后,在37℃温育30分钟,随后多次洗涤去除未结合物质。
加酶与显色:加入HRP标记的检测抗体,再次温育并洗涤,然后加入TMB底物显色。
终止与测定:加入终止液停止反应,于450nm波长测定OD值,依据标准曲线计算样品浓度。
产品规格与性能参数
检测范围:0.313-20ng/ml(具体以说明书为准)。
灵敏度:最低检测限可达0.1 ng/mL至0.188ng/ml(依品牌而异)。
样本类型:血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆等。
种属反应性:主要针对大鼠,部分试剂盒还可用于人、小鼠、猪、兔等多种物种。
规格:常见为48T/96T,适用于不同规模的实验需求。
保存条件:2-8℃保存,有效期约6个月。
样本处理

血清:室温凝固后离心收集上清。
血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝剂,离心后取上清。
组织匀浆:加入适量生理盐水研磨,离心取上清。
避免污染:不可混用不同批次或品牌的试剂,防止因化学物质(如NaN?)抑制HRP活性而导致结果偏差。
样本保存:若不能立即检测,应分装保存于-20℃,避免反复冻融;组织样本建议-70℃冷冻。
试剂与样本准备阶段

温度平衡(最容易被忽视的点)
操作: 从冰箱取出的试剂盒(包括标准品、酶标试剂、样品等)必须在室温(18-25℃)下平衡 30 分钟。
后果: 冷试剂直接使用会导致孔内温差,产生冷凝水或非特异性背景,严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液: 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配: 酶标试剂和显色液(如 TMB)对光和热敏感,建议在使用前配制工作液,避免失效。
样本处理
避免溶血: 血清样本如果发生溶血(红细胞破裂),会释放过氧化物酶,导致假阳性或背景过高。
离心去杂质: 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心,去除沉淀和悬浮物,防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数: 如果样本浓度过高,超出标准曲线范围,必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
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ELISA试剂盒的主要优点
ELISA之所以被广泛应用,主要归功于以下几个核心优势:
灵敏度高(抓得准):
它利用酶的催化放大作用,能将微弱的信号放大,因此可以检测到样本中极低浓度的目标物质(甚至达到皮克级 pg/mL)。哪怕样本里只有微量的病毒、激素或蛋白质,它也能“捕捉”到。
特异性强(瞄得准):
基于抗原-抗体的特异性结合原理,试剂盒中的抗体通常只与目标物质反应,很少受样本中其他杂质的干扰。这大大降低了假阳性率,结果准确可靠。
操作简便且快速:
相比于一些复杂的仪器分析方法,ELISA的操作流程相对标准化。市面上的试剂盒通常是一套完整的组件,按照说明书进行加样、孵育、洗板、显色即可。整个过程通常在几小时内就能完成。
高通量与适用性广:
它通常采用96孔板或48孔板,一次实验可以同时处理几十个样本,非常适合大规模的流行病学筛查或批量科研实验。此外,它不仅能测蛋白,还能测抗体、激素、药物残留甚至农药,应用领域覆盖了医学、食品安全和环境监测。
安全稳定:
不像放射免疫法那样使用放射性同位素,ELISA使用的是酶标记,对人体和环境无辐射危害,且试剂保存时间较长。
关键字: 大鼠基质金属蛋白酶抑制因子2; TIMP;ELISA试剂盒;
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