试剂盒组成
2×qPCR MagicMix：预混荧光定量PCR反应液，含DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺及优化缓冲体系。
特异性引物：针对草鱼呼肠孤病毒1型保守序列设计，确保高特异性，无交叉反应。
阳性对照：含GCRV-1靶序列的质粒DNA，用于实验质控。
阴性对照：无核酸酶水，排除污染干扰。
RNA提取辅助试剂（可选）：包括裂解液、洗涤液等，需单独订购。
产品名称 | 草鱼呼肠孤病毒1型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Grass Carp Reovirus Type 1 (GCRV-1) Dye-based qRT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3734 |
实验操作步骤
样本处理：
提取待测样本（如鱼体组织或细胞培养物）总RNA，建议使用配套RNA提取试剂。
RT-PCR反应体系配制（20μL体系）：
2×qPCR MagicMix：10μL
引物混合液：2μL
模板RNA：2μL（建议浓度50-100ng/μL）
无核酸酶水：补至20μL
荧光定量PCR程序：
逆转录：50℃ 15分钟（若含逆转录步骤）；
预变性：95℃ 3分钟；
扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。
性能参数
灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的病毒RNA。
特异性：仅针对GCRV-1型，与其他水生动物病毒无交叉反应。
重复性：批内与批间变异系数（CV）≤5%。
注意事项
实验前需严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免污染。
试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融（建议分装保存）。
阳性对照需与待测样本分开存放，防止交叉污染。
扩增曲线若出现异常（如非特异性峰），需复核RNA质量及引物特异性。
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