预期用途
本试剂盒用于体外定性检测临床样本中的博兹曼荧光杆菌(Chromobacterium violaceum)核酸。适用于临床疑似感染病例的辅助诊断、环境监测及科研用途。
产品名称 | 博兹曼荧光杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Fluviicola bozemanensis Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3742 |
检验原理
本试剂盒采用TaqMan探针法荧光定量PCR技术，针对博兹曼荧光杆菌特异性基因序列设计引物和探针。PCR扩增过程中，Taq DNA聚合酶水解与模板结合的探针，使荧光报告基团与淬灭基团分离，产生荧光信号。通过实时监测荧光信号变化，实现对起始模板的定量分析。
主要组成成分
2×qPCR Master Mix (含dNTPs、Mg²⁺、Taq酶等)
博兹曼荧光杆菌特异性引物探针混合液
阳性对照(重组质粒，1×10⁵ copies/μL)
阴性对照(无核酸水)
RNase-free水
储存条件及有效期
保存于-20℃避光保存
有效期12个月
反复冻融不超过5次
适用仪器
ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche LightCycler 480等主流荧光定量PCR仪。
样本要求
样本类型：血液、组织、脓液、环境样本等
样本采集：使用无菌容器采集
运输保存：2-8℃保存不超过72小时，长期保存应置于-70℃
检验方法
1 样本处理
按照核酸提取试剂盒说明书提取样本DNA。
2 PCR反应体系配制(20μL体系)
| 组分 | 体积(μL) |
| 2×qPCR Master Mix | 10 |
| 引物探针混合液 | 2 |
| 模板DNA | 5 |
| RNase-free水 | 补至20 |
3 PCR反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 采集荧光 |
| 预变性 | 95℃ | 3min | 1 | 否 |
| 变性 | 95℃ | 15s | 40 | 否 |
| 退火延伸 | 60℃ | 45s | 40 | 是 |
质量控制
阴性对照：Ct值应≥38或无Ct值
阳性对照：Ct值应在18-22之间
内参基因：建议同时检测内参基因(如人类β-actin)
结果判读
阳性：Ct值≤35且有典型扩增曲线
可疑：35<Ct值<38，建议重复检测
阴性：Ct值≥38或无Ct值
检验方法的局限性
检测结果应结合临床症状和其他检查结果综合判断
样本中PCR抑制物可能导致假阴性
核酸提取质量影响检测灵敏度
产品性能指标
灵敏度：≤50 copies/reaction
特异性：不与常见细菌发生交叉反应
重复性：CV≤5%
注意事项
本试剂盒仅用于体外诊断
实验过程应分区操作，避免污染
废弃物应按照生物安全要求处理
不同批号试剂组分不可混用
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