重组蛋白生产流程:
通常包括以下几个核心步骤:
基因克隆:首先,科学家需要获取编码目标蛋白的特定基因序列(目的基因)。
构建载体:将目的基因插入到一个被称为“载体”的DNA分子中,这个载体就像是一个运输工具,
能将目的基因送入宿主细胞并指导其表达。
转入宿主:将构建好的重组载体导入选定的宿主细胞中,这个过程称为“转化”或“转染”。
表达与培养:宿主细胞在适宜的条件下进行大规模培养,其自身的遗传系统会读取重组载体上的基因信息,开始大量生产目标蛋白。
纯化:通过一系列复杂的生物化学方法(如层析技术),将目标重组蛋白从宿主细胞的众多混合物中分离出来,以获得高纯度的产品。
产品概述:
重组人EIF5A蛋白(Recombinant Human Eukaryotic Translation Initiation Factor 5A)是一种通过基因工程技术在体外表达和纯化的高度保守的翻译调控因子。尽管其名称中包含“翻译起始因子”,但现代研究表明它实际上主要参与翻译的延伸阶段,特别是解决核糖体在合成特定氨基酸序列时的“停滞”问题。作为真核生物中唯一含有特殊氨基酸羟基腐胺素的蛋白质,EIF5A在维持细胞稳态、调控细胞增殖与凋亡中扮演着不可或缺的角色。
产品名称; Recombinant Human EIF5A
别名; eIF4D; eIF-4D; eIF5A; EIF-5A; EIF5A1; eIF-5A1; eIF-5A-1; eIF5AI; Eukaryotic initiation factor 5A isoform 1; eukaryotic initiation factor 5A; eukaryotic translation initiation factor 5A; eukaryotic translation initiation factor 5A-1; MGC104255; MGC99547; Rev-binding Factor
宿主; E.Coli
表达区间; 1-154
分子量; 37.4 KDa
标签; N-terminal His-IF2DI Tag
纯度; Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
应用; Western Blot, ELISA
性状; Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
溶解方法; Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储; The lyophilized protein is stable at -20 °C for up to 1 year. For extended storage, it is recommended to further dilute in working aliquots after reconstitution. The protein solution is stable at ≤ -20 °C for 3 months, or 2-7 days at 2-8 °C under sterile conditions.Avoid repeated freeze/thaw cycle.
操作要点:
电泳条件:使用15% SDS-PAGE凝胶,以提高对小分子量蛋白(~13.4 kDa)的分辨率。
转膜参数:采用湿转法,100 V、60–90分钟(4°C),使用PVDF膜(需甲醇预活化)。
抗体选择:
一抗:抗CST3多克隆抗体(如兔源抗体),推荐稀释比为1:1000。
二抗:HRP标记的山羊抗兔IgG,稀释比1:10,000。
显色方式:ECL化学发光法,预期条带位于~13.4 kDa处。
内参建议:由于CST3分子量较小,可选用GAPDH(~37 kDa)或β-actin(~42 kDa)作为内参,避免条带重叠。
注意事项:
安全提示: 操作时需佩戴手套和护目镜,遵循实验室生物安全规范。
安全提示:仅限研究使用,避免接触临床样本;操作时需佩戴防护装备。
质量控制:产品纯度通过SDS-PAGE验证,确保生物活性稳定;避免使用含硫柳汞等有毒物质的试剂。
兼容性:适用于多种实验体系,但需优化浓度以避免非特异性结合。
公司正在出售的产品:
同源盒蛋白转录因子EN2 | AP反应终止缓冲液 |
FAM134A蛋白 | ?石蜡切片组织COLLAGEN III蛋白表达NBT显色光学显微镜酶联免疫试剂盒 |
待测样品处理试剂盒 | 细胞IKB-ALPHA蛋白表达比色法定量酶联免疫试剂盒 |
噬菌体粗提试剂盒 | 食物环(cyclamate)含量高效液相色谱法定量酶联免疫试剂盒 |
细胞ERK1激酶活性定量pcr检测试剂盒(A/B/C) | 钠/氢交换样结构域蛋白1抗体 |
高度保守基因相关蛋白Membralin | 毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3抗体 |
细胞样品氧化酶活性测定试剂盒 | 冰冻切片神经纤维银染试剂盒 |
组蛋白西方杂交分析试剂盒 | 细胞SYK激酶活性定量pcr检测试剂盒(A/B/C) |
转录因子ETV6 | 乙型肝炎病毒X蛋白HBX抗体 |
甲基化组蛋白H3(di methyl K27)单克隆 | ALKB蛋白抗体 |
PE标记小鼠CD154单克隆 | 亮氨酸拉链蛋白抗体 |
Cy7标记的腱调蛋白/软骨调节素样1蛋白 | Recombinant Human EIF5Aε-微管蛋白/ε Tubulin抗体 |
细菌尿素酶(UREASE)活性化学发光法定量检测试剂盒 | Kelch样蛋白18抗体 |
关键字: EIF5A;37.4 KDa; 1-154;
上海西格生物有限公司于2019年6月18日成立。
西格生物专注于实验室和公共卫生领域,利用互联网、数据分析及自动化技术,包括实验室固定资产、仪器设备、生物样本、化学品、试剂、配件耗材、环境、仪器自动化和高通量筛选等一体化综合管理平台。不断为各行业实验室细胞生命学产品、技术服务、免疫学和分子学产品,截止至2024年5月,西格生物已为生命科学、检验检测、化工材料、科研院所、政府机构多行业300余家知名客户提供实验室完整解决方案。本着帮助用户实现“让科研场所更智能、让科研人员更专注、让科学服务更高效“的愿景,西格生物将继续在实验室科研产品领域持续发力,更加重视本土化,建构通用性高、适应性好、模块搭配灵活,能快速响应客户需求的产品。