副溶血性弧菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法） 新品

 产品介绍：

该试剂盒主要用于食品、水产品及环境样品中副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）的快速检测。副溶血性弧菌是一种常见的食源性致病菌，广泛存在于近海海水、海底沉积物及鱼、虾、贝类等海产品中。该试剂盒基于恒温荧光检测技术，无需复杂的热循环仪，可在恒定温度下快速扩增并检测目标核酸，适用于基层监管、企业质检及现场应急检测。

 �� 病原背景与检测意义

病原简介：副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一种革兰氏阴性杆菌，嗜盐生长，是引起细菌性食源性疾病的主要病原菌之一。

危害特征：

致病性：感染后主要引起急性肠胃炎，表现为腹痛、腹泻、呕吐、发热等症状。

高危食品：主要污染生食或未煮熟的海产品，如牡蛎、贝类、虾、蟹等。

检测意义：传统的培养法检测周期长，该试剂盒通过检测特异毒力基因（如toxR、tdh或trh基因），可快速筛查食品及环境样本中的致病性副溶血性弧菌，为食品安全预警提供依据。

�� 检测原理与核心优势

该试剂盒采用的是恒温荧光检测技术（通常为LAMP或RPA原理）。

核心原理：针对副溶血性弧菌基因组中高度保守的特异核酸序列（如toxR基因或耐热直接溶血素基因tdh）设计特异性引物。在恒温条件下（通常为60℃-65℃），利用链置换DNA聚合酶对目标片段进行指数级扩增。随着DNA的合成，反应体系中的荧光染料（如SYTO-9或钙黄绿素）嵌合到双链DNA中发出荧光，仪器实时监测荧光信号的变化，从而实现对细菌核酸的定性检测。

自动判读：仪器会根据荧光曲线的拐点（Tt值）自动判读结果，部分试剂盒也可通过肉眼观察颜色变化（如从橙色变绿色）进行判读。

主要优势：

操作快速：整个检测过程通常仅需45-60分钟，无需复杂的热循环。

高灵敏度：检出限可达10-100 CFU/mL，能够检测出极低含量的病原菌。

高特异性：引物针对副溶血性弧菌特有序列设计，与其他常见弧菌（如霍乱弧菌、创伤弧菌等）无交叉反应。

设备便携：仅需恒温荧光检测仪或干浴锅配合蓝光灯，适合现场快速筛查。

�� 产品性能指标

指标项目  性能参数参考

检测范围  1×10³ ~ 1×10⁸ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

最低检测限  10-100 CFU/mL

反应时间  45-60 min

反应温度  60℃ - 65℃

适用仪器  Genie系列、DHelix-C、ESE Tube Scanner、恒温荧光检测仪

适用样本  食品（鱼、虾、贝类）、水体（海水、养殖水）、环境拭子、粪便等

�� 主要组分与储存

试剂盒通常包含以下组分（以24T或48T规格为例）：

反应液：含有dNTPs、缓冲液、Mg²⁺等。

酶液/冻干粉：含有Bst DNA聚合酶或预混的冻干酶。

阳性对照：含有副溶血性弧菌目标基因片段的质粒或灭活菌液。

阴性对照：灭菌纯水。

显色剂/荧光染料（部分试剂盒包含）。

储存条件：所有组分应于 -20℃ 或 2-8℃ 条件下避光保存（具体视产品说明书而定），有效期通常为 12个月。

�� 标准操作流程

样本处理与DNA提取

采集待检测的食品、水体或拭子样本。

使用CTAB法或商品化的基因组DNA提取试剂盒，提取样本的基因组DNA作为模板。

试剂准备

将试剂从冰箱取出，室温平衡或在冰上解冻。

涡旋混匀各组分，并瞬时离心。

反应体系配置

在冰上操作，按说明书比例配制反应体系（通常为25 μL）。

将配制好的反应液分装至PCR管中。

上机扩增与检测

将配置好的反应管放入恒温荧光检测仪中。

设置反应温度（如63℃）和反应时间（如45 min）。

仪器实时监测荧光信号变化，并自动判读结果。

结果判读

阳性：荧光曲线呈典型的“S”型增长，且Tt值（Threshold Time）≤ 45 min。

阴性：荧光曲线为直线或轻微斜线，无“S”型扩增曲线，或Tt值无定义。

⚠️ 注意事项

防止污染：实验应严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免气溶胶污染。

操作规范：试剂配制和加样步骤建议在冰上进行，避免酶活性损失。反应液对光敏感，应避光保存和使用。

质控要求：每次实验必须设置阴性对照（无模板）和阳性对照。若阴性对照出现阳性扩增或阳性对照无扩增，则本次实验结果无效。

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注意事项

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。