产品介绍：
该试剂盒基于恒温荧光检测技术（如LAMP法），用于快速、灵敏地检测食品、动物组织或环境样品中是否存在海豚链球菌的特异性核酸片段。
�� 产品基本信息
检测原理：恒温荧光法（Loop-mediated Isothermal Amplification, LAMP）。该技术利用链置换扩增酶（如Bst酶）在恒定温度（通常为63℃）下，针对靶基因的6个特定区域设计特异性引物，对核酸进行高效、特异的扩增。
适用仪器：Dhelix-C、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308C等恒温荧光检测仪，或具备FAM通道的荧光定量PCR仪（如ABI 7500）。
检出限：通常为 10³ copies/μl 基因组DNA，具有高灵敏度。
主要用途：仅用于科研或食品安全/水产疫病检测，严禁用于临床医疗。
产品名称 | 海豚链球菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法） | 货号 | AP3540 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 50T |
�� 试剂盒组成（以96测试为例）
成分 规格/含量 说明
A-SI-I (反应液) 22μL × 96管 预分装管，含反应缓冲液、dNTPs、Bst酶等
B-I (显色剂/增强剂) 90μL × 2支 通常为荧光染料（如SYTO-9）或反应增强液
NG-I (阴性对照) 50μL × 3支 无模板对照（NTC），用于监控污染
PG-SI-I (阳性对照) 50μL × 2支 含目标基因片段的质粒或菌液，用于验证试剂有效性
�� 实验操作流程
1. 样品处理与模板制备（样本制备区）
组织样本：取患病动物病灶组织，使用生理盐水制备成10%的匀浆液。
增菌培养（可选）：若样本菌量少，可将匀浆液接种至BHI培养基中，37℃培养24h以上。
DNA提取：
取1-2 mL培养液，10000 rpm离心5 min，弃上清。
加入500 μL生理盐水重悬，离心弃上清。
加入100 μL 提取液，剧烈涡旋混匀。
100℃加热10 min（裂解细菌释放DNA），迅速置于-20℃冰箱冷却10 min。
10000 rpm离心2 min，取上清作为模板DNA备用。
2. 反应体系配制（模板添加区）
准备工作：将试剂盒置于冰上解冻，离心30秒使液体沉底。
加样步骤：
向每管预分装的反应液（A-SI-I）中加入 1 μL B-I（显色剂）。
分别向管壁加入 2 μL 模板DNA。
加样顺序：严格按照 阴性对照 (NG-I) → 待测样品 → 阳性对照 (PG-SI-I) 的顺序添加。
盖紧管盖，离心3分钟混匀。
3. 恒温扩增反应（扩增区）
反应条件：
温度：63℃
时间：90 min
仪器设置：
若使用荧光定量PCR仪，选择FAM荧光通道，淬灭基团选None。
程序设置：63℃ 15s（变性），63℃ 45s（退火延伸），共90个循环，在63℃ 45s时收集荧光信号。
�� 结果判定
判定指标 阳性结果 阴性结果 无效结果
扩增曲线 出现典型的 "S"型 荧光扩增曲线 无"S"型曲线，仅基线波动 曲线异常或无信号
CT值/时间 CT值 < 设定阈值（通常<45min） 无CT值显示 -
阴阳性对照 PG显示阳性 (有S型曲线)
NG显示阴性 (无S型曲线) 若对照不符，结果无效
结论：若待测样品出现"S"型扩增曲线，且Ct值有效，则判定为阳性（检出海豚链球菌）；若无扩增曲线，则判定为阴性（未检出或低于检测限）。
⚠️ 注意事项
防污染：必须实行分区操作（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免气溶胶污染。移液器、枪头、实验服需专用。
避光操作：反应液对光敏感，试剂配制和加样过程应避光或在弱光下进行，使用前勿反复冻融。
废弃物处理：反应结束后，扩增管内含有潜在污染物（气溶胶），禁止开盖。请将扩增管置于密封袋内丢弃，并当日清理。
时效性：试剂在有效期内使用，不同批号试剂请勿混用。
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注意事项
防污染操作
需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。
阳性对照管理
浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。
局限性
仅限科研使用，不可用于临床诊断；
环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。
关键字： 海豚链球菌 ;核酸检测试剂盒;恒温荧光法;
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