大鼠肝成纤维细胞

产品定义：

大鼠肝成纤维细胞是存在于大鼠肝脏间质中的成纤维细胞，主要分布于汇管区和肝窦周围。它可合成和分泌胶原蛋白、蛋白多糖等细胞外基质，维持肝脏间质的结构稳定，在肝脏损伤时可被激活转化为肌成纤维细胞，大量分泌细胞外基质，参与肝纤维化的形成过程。

产品简介：

细胞详述

肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏对来自体内和体外的许多非营养性物质如各种yao物、毒物以及体内某些代谢产物，具有生物转化作用。通过新陈代谢将它们彻底分解或以原形排出体外。在肝中及外围有部分结缔组织，这些结缔组织是由成纤维细胞组成。

细胞特性

1) 细胞来源于实验动物正常肝脏组织。

2) 细胞鉴定：Vimentin免疫荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5) 细胞生长方式：长梭状，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

我们推荐使用 Delf 原代成纤维 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。
细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
原代细胞纯化与鉴定：

纯化方法：

差速贴壁法：利用不同细胞贴壁速度差异，如成纤维细胞贴壁快，上皮细胞贴壁慢，在接种后1-2小时移除未贴壁细胞，可初步分离不同细胞类型。

免疫磁珠分选法/流式细胞术：针对特定细胞表面标志物，利用特异性抗体标记细胞，通过磁珠或流式分选仪分离目标细胞，纯度可达90%以上。

鉴定手段：通过形态学观察（原代细胞形态多样，与传代细胞有差异）、免疫细胞化学染色、RT-PCR检测特异性基因表达等方法，确认目标细胞的纯度和身份。

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