重组表达原理:
基因克隆:从牛基因组中获取CST3基因的编码序列(对应氨基酸31–148),插入含有启动子、筛选标记和His标签序列的质粒载体。
宿主表达:将重组质粒转化至E. coli(如BL21菌株),在IPTG诱导下启动蛋白表达。该系统成本低、表达效率高,适合大规模生产。
蛋白纯化:利用His标签与镍柱亲和层析结合,实现高纯度(>95%)蛋白回收,再经透析或凝胶过滤去除杂质。
冻干保存:加入海藻糖作为保护剂,冻干后可长期稳定储存,复溶后保持天然构象和生物活性。
产品概述:
重组人NELFE蛋白(Negative Elongation Factor E),又称RD蛋白,是一种在大肠杆菌(E. coli)中表达的重组蛋白,通常带有N端His标签。该蛋白氨基酸范围为1-380,分子量约为41.7 kDa,纯度经SDS-PAGE检测大于95%,以冻干粉形式提供。NELFE是负延伸因子复合物(NELF)的RNA结合亚基,与DSIF协同作用,通过结合RNA聚合酶II来暂停转录的延伸,是基因表达调控的关键节点。研究表明,NELFE在胃癌、肝癌等多种肿瘤中高表达,能通过稳定下游靶基因(如E
产品名称; Recombinant Human NELFe
别名; Major histocompatibility complex gene RD, Negative elongation factor E, Negative elongation factor polypeptide E, NELF e, NELF-E, Nelfe, NELFE_HUMAN, Nuclear protein, RD, RD protein, RD RNA binding protein, RDP, RNA-binding protein RD
宿主; E.Coli
表达区间; 1-380
分子量; 41.7 kDa
标签; N-terminal His Tag
纯度; Greater than 95% by SDS-PAGE gel analyses
应用; Western Blot, ELISA
性状; Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
溶解方法; Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储; The lyophilized protein is stable at -20 °C for up to 1 year. For extended storage, it is recommended to further dilute in working aliquots after reconstitution. The protein solution is stable at ≤ -20 °C for 3 months, or 2-7 days at 2-8 °C under sterile conditions.Avoid repeated freeze/thaw cycle.
使用前准备:
离心处理
冻干粉在运输过程中可能附着于管壁或管盖,开盖前应先进行离心,确保粉末沉降至管底。
建议条件:3000–3500 rpm 离心 5 分钟
若无高速离心机,可适当延长低速离心时间
平衡温度
将冻干粉缓慢恢复至室温(避免加热加速溶解),防止因温差导致管内冷凝水影响蛋白稳定性
溶解(Reconstitution)
溶解液选择
推荐使用无菌蒸馏水或 PBS(pH 7.4)进行复溶
若用于细胞实验,可选用含 0.1% BSA 的缓冲液以增强稳定性
配制浓度
将冻干粉溶解至终浓度 0.1–1.0 mg/mL,此范围适用于大多数实验场景
浓度过高可能导致蛋白聚集,过低则易失活
混匀方式
使用移液枪头轻轻吹打数次,或上下轻柔颠倒混匀
严禁使用涡旋振荡器,以免破坏蛋白空间结构,导致活性丧失
公司正在出售的产品:
丝氨酸蛋白酶10 | 大鼠p16基因甲基化酶联免疫试剂盒 |
DNA聚合酶ζ | TRAIL 蛋白表达西方杂交分析试剂盒 |
植物源性食品小麦(wheat)基因pcr检测试剂盒 | 冰冻切片组织PAR-1蛋白表达荧光显微镜酶联免疫试剂盒 |
体液HSV2(HERPES SIMPLX2)病毒定量PCR扩增pcr检测试剂盒 | 40%ACRYLAMIDE-BIS(29:1)溶液 |
动物细胞钙ATP酶(Ca++ -ATPase)活性比色法定量pcr检测试剂盒 | 磷酸化中心粒蛋白Nudel抗体 |
副溶血性弧菌菌体鞭毛蛋白 | 成纤维细胞生长因子10抗体 |
细胞/组织基因组/线粒体DNA同步萃取试剂盒 | 组织a-(a-AMYLASE)活性比色法定量pcr检测试剂盒 |
糖果糖精(saccharin)含量红外光谱法定量pcr检测试剂盒 | 细胞尿激酶(UROKINASE)活性比色法定量pcr检测试剂盒 |
致盲基因LCA5样蛋白 | 嗅觉受体6B2抗体 |
环指蛋白1 | 2型猪链球菌溶血素抗体 |
PACE4蛋白 | 口蹄疫病毒A型抗体 |
去整合素样金属蛋白酶10(CD156c)单克隆 | Recombinant Human NELFeSPNS1抗体 |
线虫冻存试剂盒 | KIAA1543蛋白抗体 |
注意事项:
安全提示:仅限研究使用,避免接触临床样本;操作时需佩戴防护装备。
质量控制:产品纯度通过SDS-PAGE验证,确保生物活性稳定;避免使用含硫柳汞等有毒物质的试剂。
兼容性:适用于多种实验体系,但需优化浓度以避免非特异性结合。
关键字: NELFe;41.7 kDa; 1-380;
上海西格生物有限公司于2019年6月18日成立。
西格生物专注于实验室和公共卫生领域,利用互联网、数据分析及自动化技术,包括实验室固定资产、仪器设备、生物样本、化学品、试剂、配件耗材、环境、仪器自动化和高通量筛选等一体化综合管理平台。不断为各行业实验室细胞生命学产品、技术服务、免疫学和分子学产品,截止至2024年5月,西格生物已为生命科学、检验检测、化工材料、科研院所、政府机构多行业300余家知名客户提供实验室完整解决方案。本着帮助用户实现“让科研场所更智能、让科研人员更专注、让科学服务更高效“的愿景,西格生物将继续在实验室科研产品领域持续发力,更加重视本土化,建构通用性高、适应性好、模块搭配灵活,能快速响应客户需求的产品。