测定意义 :

TH位于线粒体的内膜上,又称为线粒体复合体六,催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互转化,调节线粒体NAD(H)和NADP(H)平衡。把逆向反应称为TH-2,催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。
产品名称 | 转氢酶1测试盒(比色法) | 规格 | 100管/96样、50管/48样 |
检测方法 | 微量法、紫外分光光度法 | 货号 | AS6321136 |
测定原理

NADH和NADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的转氢反应不能导致340nm吸光度发生变化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸(APAD+)替代NAD+,TH-2催化APAD+还原生成APADH,APADH在375nm有特征光吸收,测定375nm光吸收的增加速率,来计算TH-2活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
适用样本与实验条件:
广泛种属通用:适用于动物(人、鼠、兔等)的血清、血浆、组织匀浆,以及植物叶片、微生物菌液和培养细胞裂解液。
所需仪器:可见分光光度计(或酶标仪)、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器及相应规格的比色皿(玻璃或石英)。
温度控制:反应通常在 37℃(哺乳动物样本)或 25℃(植物/微生物样本)下进行,需严格控温以保证酶活稳定性。
常见分类与检测原理:

根据检测方法学的不同,生化试剂盒主要分为以下几类:
检测方法 原理简述 典型应用
比色法/分光光度法 通过测定反应体系颜色深浅(吸光度)来定量,如Trinder反应。 检测葡萄糖、尿酸、总蛋白等。
酶联免疫法 (ELISA) 利用抗原-抗体特异性结合反应,通过酶促显色来检测。 检测特定蛋白、细胞因子、激素等,如人游离血红蛋白。
生物发光法 利用荧光素酶催化底物发光,通过检测发光强度来定量。 如ATP检测试剂盒,灵敏度极高。
此外,还有化学发光法、胶乳增强免疫比浊法等。
操作步骤:
试剂准备:按说明书将冻干粉试剂用蒸馏水溶解,部分试剂需临用前稀释 100 倍使用。
加样反应:在比色皿中依次加入提取液、试剂一、试剂二及样本,充分混匀。
数据测定:在 600nm 波长下,记录反应初期(如 30 秒)及反应一段时间后(如 3 分 30 秒)的吸光值。
结果计算:根据测定孔与对照孔的吸光度差值(ΔOD),结合反应时间、蛋白浓度及标准品曲线计算酶活力单位。
注意事项:
温度控制:粗酶液提取必须在冰上操作,除特定试剂外,其他试剂测定过程中也需置于冰上。
试剂毒性:部分试剂盒中的递氢体或显色剂(如试剂九)可能具有毒性,操作时请佩戴手套并在通风橱进行。
仪器要求:需自备可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机及 1mL 玻璃比色皿。
适用范围:该试剂盒仅适用于科研实验,不可用于临床诊断。
公司正在出售的产品:
PRR24 富含脯氨酸蛋白24抗体 | 大鼠Ⅲ型前胶原(HPCⅢ)检测试剂盒 |
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