巴西固氮螺菌

商品属性：

产品描述：

巴西固氮螺菌（Azospirillum brasilense）是固氮螺菌属革兰氏阴性细菌，呈螺旋状或杆状，具鞭毛能运动。主要存在于植物根际，与多种禾本科植物形成联合共生关系，可将空气中的氮转化为氨，促进植物生长，还能产生植物激素如生长素，刺激植物根系发育。培养常用含苹果酸、酵母提取物等成分的培养基，最适生长温度28-30℃，在农业上可作为生物肥料应用。
培养基  蛋白胨：10.0，牛肉粉：3.0，氯化钠：5.0，琼脂：15.0，pH值：7.3±0.1(25℃)

生长条件  30℃；18-24h；好氧

存储条件  2-8℃

安全等级  1

形态  菌落直径为1-2mm，圆形，边缘整齐，不透明，正面灰白色，中间凸起，表面光滑，表面明亮，质地湿润，易挑起，G－（红），杆菌，纯度：纯

模式菌株  no

操作步骤  ①准备上述平板 1-2 块；②安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；③吸取 0.5mL 无菌水打入冻干管，充分溶解菌粉后，打入平板中 200μL/个，涂布均匀；④将平板置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。

共享方式  公益性共享

菌种活化流程：

1. 冻干菌种活化

超净台紫外消毒 30 min，75% 酒精擦拭菌种管外壁

无菌打开冻干管，加入0.5–1 mL 无菌 ISP‑2 液体培养基，轻轻吹打溶解，室温静置 15–20 min 复苏

取全部菌液，划线接种 ISP‑2 斜面或涂布 ISP‑2 平板

30℃恒温培养 5–7 天，至长出灰色孢子菌落

2. 甘油管 / 斜面活化

甘油管冰上缓慢解冻；斜面直接无菌操作

无菌接种环挑取菌体 / 孢子，划线分离单菌落于 ISP‑2 平板

30℃培养 5–7 天，挑取典型单菌落转接斜面，作为工作种子

3. 孢子悬液制备（发酵用）

成熟斜面加入5–10 mL 无菌 0.85% 生理盐水，轻轻刮下孢子

用无菌脱脂棉 / 玻璃珠过滤，去除菌丝，制成孢子悬液（浓度 10⁶–10⁸ CFU/mL）

4℃短期保存，或用于接种发酵培养基

菌种保存：

1. 短期保存

固体斜面/半固体：将生长良好的菌种置于 4℃ 冰箱。一般可保存数周至数月，需定期传代。

2. 长期保存

冷冻保存法（最常用）：

配制保护剂：常用 20-30% 无菌甘油。

收集菌体：刮取新鲜培养的菌苔或菌液，与保护剂混合，使菌悬液浓度达到较高密度。

分装：分装至无菌冻存管中（每管0.5-1 mL），拧紧盖子。

冷冻：置于 -80℃ 超低温冰箱或液氮中。

冻干保存法：需使用冷冻干燥机，适合长期保藏。

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