产品用途
科研实验，用于牛肠杯状病毒RNA的定性或定量检测。
产品名称
牛肠道病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
英文名称
Bovine Enterovirus Dye-based qRT-PCR Kit
产品规格
50T
产品分类
荧光定量PCR
检测类型
PCR检测
产品货号
PR3962
试剂盒组成
RT-PCR预混液：包含DNA聚合酶（如Taq酶）、dNTPs、缓冲液及荧光染料（如SYBR Green）。
引物混合液：特异性靶向BECV基因序列的引物。
阳性对照：已知浓度的BECV RNA标准品，用于标准曲线绘制。
阴性对照：无RNA酶水，确保无污染。
超纯水：用于反应体系调整。
实验步骤
RNA模板制备：提取待测样本RNA，建议使用5μL模板量。
反应体系配制（以50μL为例）：
RT-PCR预混液：25μL
引物混合液：各2μL
RNA模板：5μL
超纯水：补足至50μL
（标准曲线需梯度稀释阳性对照，分别加入2-7号管）
PCR程序设置：
逆转录：50℃ 30分钟
预变性：94℃ 10分钟
扩增循环（40次）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光信号）
结果分析
定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算待测样本浓度。
定性检测：
阴性对照：Ct≥40或无扩增曲线。
阳性对照：Ct≤30且曲线呈典型指数增长。
样本判定：
Ct≤35：阳性；
Ct≥40：阴性；
35<Ct<40：重复检测，若重复结果Ct<40且曲线起峰则判为阳性。
注意事项
操作需在无核酸污染环境下进行，建议使用防污染试剂。
不同批次试剂避免混用，保存时避免反复冻融。
实验参数可根据仪器型号微调，建议优先使用FAM通道采集信号。
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