牛副流感病毒3型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

牛副流感病毒3型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品基本信息

保存条件：-20℃避光保存

适用样本：牛鼻拭子、咽拭子、肺组织等呼吸道样本

检测范围：2×10³～1×10⁸ copies/mL

用途：科研用途，不适用于临床诊断

检测原理

基于实时荧光定量RT-PCR技术，针对BPIV-3保守基因区域（如P基因）设计特异性引物及TaqMan探针。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。扩增过程中，Taq酶切割探针释放荧光信号，通过仪器实时监测荧光强度变化，实现核酸定性检测。

试剂盒组成

RT-PCR反应预混液（含逆转录酶、Taq酶、dNTPs等）

BPIV-3特异性引物及探针混合液

阳性对照（非活体DNA片段，1×10⁸ copies/μL）

阴性对照（无核酸酶水）

核酸提取试剂（可选配套组分）

操作流程

样本处理：

无菌采集呼吸道样本，避免交叉污染。

使用配套核酸提取试剂或商业化RNA提取试剂盒（如磁珠法）提取样本RNA。

反应体系配制：

按比例混合RNA模板、预混液、引物探针及对照，总体积20μL。

荧光定量PCR程序：

逆转录：50℃ 15分钟（可选一步法）。

预变性：95℃ 2分钟。

扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（40循环），于60℃采集荧光信号。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且扩增曲线呈S型。

可疑：35＜Ct值＜40，建议重复检测。

阴性：无扩增曲线或Ct值≥40。

注意事项

实验需在无菌环境下操作，避免气溶胶污染。

试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融。

阳性对照需与其他组分分区域操作，防止污染。

不同仪器需根据说明书调整荧光通道参数（如FAM通道）。

性能参数

特异性：不与牛呼吸道合胞病毒（BRSV）、牛冠状病毒（BCoV）等交叉反应。

灵敏度：最低检测限为2×10³ copies/mL。

重复性：批内及批间变异系数（CV）＜5%。

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