曲霉属通用染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法荧光定量PCR技术，针对曲霉属真菌高度保守基因区域设计特异性引物。通过实时监测PCR扩增过程中荧光信号的变化，实现对曲霉属核酸的定性和定量检测，线性范围覆盖5个数量级（10^2~10^7拷贝/μL），分析灵敏度可达100拷贝/反应。

试剂组成

| 组分名称 | 规格 | 主要功能 |

| 曲霉属预混扩增液 | 1 mL × 1管 | 含dNTPs、酶及优化缓冲液 |

| 阳性对照（标准品） | 50 μL × 1管 | 1×10^8拷贝/μL曲霉属DNA |

| 阴性对照（无核酸水）| 50 μL × 1管 | 排除污染及体系验证 |

| DEPC-H2O | 1 mL × 1管 | 稀释标准品及空白对照 |

注意：不同批号组分不可混用，使用前需充分离心。

操作步骤

1. DNA提取

使用兼容的核酸提取试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

2. 标准曲线制备（样本制备区）

标记离心管（7~2号），依次加入45 μL DEPC-H2O。

梯度稀释阳性对照：

7号管：5 μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL）→ 1×10^7拷贝/μL。

依次稀释至2号管（1×10^2拷贝/μL），每步更换带滤芯枪头，震荡混匀后冰上保存。

3. PCR反应体系配制（PCR准备区）

每20 μL反应体系：

预混扩增液10 μL

引物混合液2 μL

模板DNA 2 μL（样本/标准品/对照）

DEPC-H2O 6 μL

4. 上机检测

程序设置：

预变性：95℃ 3分钟

循环：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光），共40循环

熔解曲线分析：60℃~95℃，升温速率0.5℃/秒

结果判读

定性：Ct值≤35且熔解曲线为单一峰，判为阳性。

定量：根据标准曲线计算样本拷贝数。

质控要求：阴性对照无扩增，阳性对照Ct值在预期范围内。

注意事项

实验分区操作，避免气溶胶污染。

试剂解冻后需涡旋混匀，短暂离心后使用。

本产品仅限科研用途，不可用于临床诊断。

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