人椎间盘纤维环细胞

人椎间盘纤维环细胞

细胞简介 ：

人椎间盘纤维环分离自椎间盘组织；椎间盘是位于脊柱两椎体之间，由软骨板、纤维环、髓核组成的一个密封体。上下有软骨板，是透明软骨复盖于椎体上，下面骺环中间的骨面。上下的软骨板与纤维环一起将髓核密封起来。纤维环由胶原纤维束的纤维软骨构成，位于髓核的四周。纤维环的纤维束相互斜行交叉重叠，使纤维环成为坚实的组织，能承受较大的弯曲和扭转负荷。纤维环的前侧及两侧较厚，而后侧较薄。纤维环的前部有强大的前纵韧带，后侧的后纵韧带较窄、较薄。纤维环细胞密度为9000个细胞/mm3，其外层的细胞呈梭型，主要属于纤维细胞，内层细胞呈圆形，主要属于软骨细胞。在培养的情况下，用透射电镜观察则有许多共同的超微结构表现，它们的核较圆，核仁较明显。细胞质内可见大量的附有核糖体颗粒的粗面内质网和滑面内质网。细胞质内线粒体多，为椭圆形，有的可看到双层单位膜，由单位膜包绕初级深酶体和次级深酶体。细胞质内有一系列的扁平囊及小泡主成的高尔基复合体和分泌颗粒，纤维环细胞合成分泌蛋白多糖及胶原纤维的能力很旺盛，保证纤维环生理代谢活动所需的构造物质的供给。一但这种供给减少，纤维环的生物性能就会减弱，椎间盘开始退变。

产品信息：

产品名称 人椎间盘纤维环细胞

英文名称 Human Intervertebral Disc Fibroblast Cells

组织来源 椎间盘组织

默认种属 人

产品规格 5×10^5Cells/T25

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

人椎间盘纤维环细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

方法简介 公司实验室分离的人椎间盘纤维环采用胶原酶-联合消化法并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测 公司实验室分离的人椎间盘纤维环经Ⅰ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养操作方法：

核心特点

高度生理相关性：保留了体内来源组织的结构、功能和基因表达特征。

有限寿命：与无限增殖的肿瘤细胞系不同，原代细胞增殖能力有限，经过一定次数的分裂后会进入衰老期，这更符合正常细胞的生理状态。

异质性：初始培养物通常是多种细胞类型的混合物，有时需要通过差速贴壁等方法进行纯化。

操作要求高：对培养环境、试剂质量和无菌操作的要求极为严格，培养难度大于永生化细胞系。

组织块培养法

取材与剪切

在无菌条件下取出组织，用Hanks液或PBS清洗，去除血污和脂肪、结缔组织等非目标成分。

用眼科剪将组织剪切成 0.5-1 mm3 的小块。

接种

用吸管将组织块均匀地贴附在培养皿或培养瓶的内表面，各组织块之间保持一定间距（约0.5 cm）。

吸去多余液体，将培养器皿翻转，放入 37℃、5% CO 的培养箱中，静置 1-3小时，让组织块牢固贴壁。

加液培养

待组织块贴壁后，轻轻翻转培养瓶，从一侧缓慢加入足量的培养液，使组织块浸没在液体中，注意不要让液体直接冲击组织块，以免冲起。

继续在培养箱中静置培养。通常 3-5天 后可观察到细胞从组织块边缘长出。

公司正在出售的产品：

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1) 1mL冻存细胞悬液装于  1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存 1个月。

2) T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过 85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。