检测原理
基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术，针对弥散黏附性大肠杆菌高度保守基因区域设计特异性引物及探针。通过实时监测PCR扩增过程中的荧光信号，实现对目标核酸的定性与定量分析，灵敏度高（可检测低至10^1拷贝/μL），特异性强（无交叉反应）。
产品名称 | 弥散黏附性大肠杆菌（大肠埃希菌）探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Diffusely Adherent Escherichia coli (DAEC) Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4857 |
产品特点
即开即用：预混优化反应体系，用户仅需提供模板DNA。
高灵敏度与特异性：引物及探针经严格验证，避免非特异性扩增。
内控设计：含阳性对照（无传染性DNA片段），便于区分假阴性。
适用范围：适用于食品、粪便、血液及病灶样本的检测（科研用途）。
试剂盒组成
| 组分 | 规格 | 用途 |
| PCR预混反应液 | 950μL ×1管 | 含酶、dNTPs、缓冲液 |
| 探针扩增液 | 50μL ×1管 | 含特异性引物及探针 |
| 阳性质控品（10^8拷贝/μL） | 50μL ×1管 | 标准曲线制备 |
| 阴性质控品 | 50μL ×1管 | 阴性对照 |
操作步骤
样本处理
样本类型：
食品：按《食品卫生微生物学检验标准》预处理。
血液：EDTA抗凝全血2mL，立即混匀。
粪便/病灶组织：无菌采集后低温保存。
DNA提取：推荐使用柱式细菌基因组DNA提取试剂盒，避免RNA污染。
标准曲线制备（定量检测）
将阳性质控品10倍梯度稀释（10^7~10^2拷贝/μL），分装至标记管中。
每稀释步骤更换滤芯吸头，冰上操作以防降解。
PCR反应体系配制
单反应体系（20μL）：
预混反应液 19μL + 探针扩增液 1μL + 模板DNA 5μL。
程序设置：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |
| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |
| 荧光采集 | 60℃ | 30 sec | |
结果判读
定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴计算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct≤36，扩增曲线呈S型。
可疑：36<Ct<40，需复测。
阴性：Ct≥40或无扩增。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行，避免气溶胶污染。
质控要求：每批次实验需包含阴/阳性对照。
仪器兼容性：适用于ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光PCR仪。
废弃物处理：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面及移液器。
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关键字： 弥散黏附性大肠杆菌（大肠埃希菌）;染料法荧光定量;PCR试剂盒;