风疹病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

风疹病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒基于SYBR Green I 荧光染料法，利用实时荧光定量RT-PCR技术，定性检测人血清、咽拭子、尿液或细胞培养物中的风疹病毒RNA。适用于：

风疹病毒感染早期诊断

先天性风疹综合征筛查

疫情监测及病毒载量分析（相对定量）

注：临床诊断需结合临床表现和本地法规要求。

检测原理

RNA提取：样本中病毒RNA被纯化。

逆转录（RT）：RNA逆转录为cDNA。

荧光定量PCR：

特异性引物扩增风疹病毒靶基因（如E1包膜蛋白基因）。

SYBR Green I 染料嵌入双链DNA，释放荧光信号。

实时监测荧光强度，生成扩增曲线，通过Ct值判定结果。

试剂盒组成

| 组分 | 规格（48测试） | 储存条件 |

| qRT-PCR预混液（含SYBR Green） | 1.2 mL | -20℃避光 |

| 风疹病毒引物混合液 | 100 μL × 2 | -20℃ |

| 逆转录酶 | 50 μL | -20℃ |

| RNase-Free水 | 1 mL | 室温 |

| 阳性对照（风疹病毒RNA） | 50 μL | -80℃ |

| 阴性对照（无RNA水） | 1 mL | -20℃ |

自备材料

RNA提取试剂盒（如柱式法）

实时荧光定量PCR仪（支持SYBR Green通道）

无核酸酶PCR管/板

离心机、移液器及灭菌吸头

操作步骤

1. RNA提取

按RNA提取试剂盒说明操作，洗脱体积建议≤50 μL。

2. 逆转录反应（20 μL体系）

| 组分 | 体积 |

| RNA模板 | ≤8 μL |

| 逆转录酶 | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL |

| RNase-Free水 | 补足至20 μL |

程序：42℃ 15 min → 85℃ 5 sec（灭活酶）→ 4℃保存。

3. 荧光定量PCR（25 μL体系）

| 组分 | 体积 |

| qRT-PCR预混液 | 12.5 μL |

| cDNA模板 | 2 μL |

| RNase-Free水 | 10.5 μL |

程序：

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |

| 扩增 | 95℃ | 10 sec | 40 |

| | 60℃ | 30 sec | |

| 熔解曲线 | 65℃→95℃ | 0.5℃/sec | 1 |

结果判读

阳性：Ct值 ≤ 35.0，且熔解曲线出现单一特异峰（Tm值：XX±2℃）。

可疑：Ct值 35.1–38.0，建议重复检测。

阴性：Ct值 ≥ 38.0 或无Ct值。

注：阴性/阳性对照必须符合预期，否则实验无效。

性能参数

灵敏度：检出限 ≤ 50 copies/mL

特异性：不与麻疹病毒、腮腺炎病毒等交叉反应

重复性：Ct值变异系数（CV）≤ 5%

线性范围：10² ~ 10⁸ copies/mL（R² > 0.99）

注意事项

严格分区操作（试剂准备区→样本处理区→扩增区），避免污染。

熔解曲线分析是区分非特异性扩增的关键步骤。

试剂解冻后置于冰上使用，避免反复冻融（≤3次）。

本产品仅用于科研，临床诊断需经国家药监局批准。

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