产品概述

本试剂盒基于基因探针法荧光定量PCR技术开发,专用于高灵敏、高特异性的DNA靶标检测。适用于定性或定量分析,线性范围覆盖5个数量级,检测灵敏度可达100拷贝/反应。
产品名称 | 基因探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Universal Gene Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4867 |

产品规格
规格:50次/盒(20μL体系)
保存条件:-20℃避光保存,有效期12个月;需低温运输。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪,包括ABI系列、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等。
试剂盒组分

预混PCR反应液(含优化引物及探针)
荧光PCR专用模板稀释液
阳性对照(无传染性DNA片段,1×10^7拷贝/μL)
使用说明书
检验原理

特异性:引物针对靶基因高度保守区设计,避免交叉反应。
灵敏度:检测下限为100拷贝/反应,提供阳性对照以排除假阴性。
闭管操作:一管式设计降低污染风险。
操作步骤

1. 标准曲线制备(独立区域操作)
使用阳性对照进行10倍梯度稀释(10^1–10^6拷贝/μL),标记6管,依次加入稀释液并震荡混匀,冰上保存备用。
2. 样本处理
建议设置N+2个样本(含阳性/阴性对照)。
核酸提取:推荐使用兼容的核酸纯化试剂盒,按说明书操作。
3. qPCR反应体系(20μL)
样品管:7μL待测DNA模板 + 10μL预混液 + 2μL引物混合液 + 1μL探针。
阴性对照:以超纯水替代模板。
标准曲线管:加入梯度稀释的标准品。
4. 扩增程序
按仪器说明书设置循环参数(建议:95℃预变性5分钟;95℃ 15秒,60℃ 1分钟,40循环)。
数据分析
定量:以标准曲线log值为横轴,Ct值为纵轴,计算样本浓度。
定性:Ct≤30为阳性,≥35为阴性;30<Ct<35需复测。
注意事项

避免试剂反复冻融,使用前充分离心。
操作分区进行(试剂准备区、样本处理区、扩增区),防止污染。
阳性对照需最后加入,避免交叉污染。
质量控制
阴性对照Ct值应≥35,阳性对照Ct值≤30且扩增曲线典型。
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