猪伪狂犬病毒野毒株(gE基因)探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 猪伪狂犬病毒野毒株(gE基因)探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Pseudorabies Virus Wild Type Strain (gE gene) Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4674 |
预期用途
用于定性或定量检测猪伪狂犬病毒野毒株(gE基因),区分疫苗株与野毒感染,适用于科研及疫情监测。
检测原理
基于TaqMan探针法,靶向gE基因保守区域设计特异性引物及探针,通过荧光信号实时扩增分析。
试剂盒组成
| 成分 | 规格/数量 | 说明 |
| qPCR预混缓冲液 | 500 μL | 含dNTPs、Mg²⁺等反应组分 |
| 热启动Taq酶混合液 | 50 μL | 含探针法专用酶 |
| 荧光模板稀释液 | 1 mL | 用于标准品梯度稀释 |
| 引物-探针干粉 | 50次反应(20 μL体系) | 含gE基因特异性引物及FAM标记探针 |
| 阳性对照(非传染性)| 50 μL(10⁷拷贝/μL) | 质粒DNA或合成片段 |
| 阴性对照 | 40 μL | 灭菌纯水 |
操作步骤
标准曲线制备(定量检测需6个梯度稀释,10¹~10⁶拷贝/μL):
使用专用稀释液按10倍梯度稀释阳性对照,避免交叉污染。
样本DNA提取:
建议设置制备对照(PC/NC),推荐兼容市售DNA提取试剂盒。
qPCR反应体系(20 μL):
预混液15 μL + 模板DNA 5 μL,每个样本设3复孔。
扩增程序:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 信号采集(FAM通道) |
| 逆转录 | 50℃ | 10 min | 否 |
| 预变性 | 95℃ | 10 min | 否 |
| 扩增循环(40×) | 95℃ 15 sec → 60℃ 60 sec | 是 |
结果判读
定量分析:以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴,计算样本拷贝数。
定性分析:
阴性:Ct≥40或无扩增曲线;
阳性:Ct≤39且曲线呈典型S型;
灰区(39<Ct<40):需复测确认。
注意事项
分区操作:样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行。
防污染措施:使用带滤芯枪头,实验后以10%次氯酸或75%乙醇消毒台面。
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融(有效期12个月)。
适用范围:仅限科研,不可用于临床诊断。
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