鲫鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 鲫鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Crucian Carp-derived Component Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4680 |
产品概述
本产品为鲫鱼源性成分探针法荧光定量PCR检测试剂盒，采用实时荧光定量PCR技术，专门用于检测样品中鲫鱼源性成分的存在及定量分析。本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断。
产品特点
即开即用，用户只需提供样品DNA模板
引物和探针针对鲫鱼源性成分特异性设计，灵敏度高
提供阳性对照，便于区分假阴性样品
特异性强，不会与其他物种DNA发生交叉反应
适用于定性和定量检测，定量检测线性范围达5个数量级
本产品可进行50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应
包装规格及成分
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |
| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50μL |
| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 试剂四 | PCR引物-探针干粉 | 50T |
| 试剂五 | PCR阳性对照(10⁷拷贝/μL) | 50μL |
操作流程
标准曲线样品制备
标记6个离心管，编号6至1
各管加入45μL荧光PCR专用模板稀释液
在6号管中加入5μL阳性对照(1×10⁷拷贝/μL)，震荡混匀，得到1×10⁶拷贝/μL标准品
依次稀释至1号管，得到6个10倍稀释梯度的标准曲线样品
样品DNA制备
建议设置N+2个提取(N为待测样品数，增加阳性对照和阴性对照)
使用兼容的DNA提取方法纯化样品DNA
qPCR反应设置(20μL体系)
定量分析需设置N+9个反应管(N+2样品管、1阴性对照管、6标准曲线管)
按比例加入缓冲液、酶混合液、引物探针和模板
PCR扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 10分钟 |
| PCR循环(40次) | 95℃ | 15秒 |
| | 60℃ | 60秒(采集FAM通道信号) |
数据分析
定量分析：以标准品浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算待测样品浓度。
定性分析：
阴性对照Ct≥40
阳性对照Ct≤39且有典型扩增曲线
待测样品Ct≤39判为阳性，≥40判为阴性
储存与运输
储存条件：-20℃保存，有效期12个月
运输条件：2-8℃冰袋运输，避免反复冻融
注意事项
操作需在独立区域进行，防止污染
使用前所有组分应完全融化并混匀
反应液需避光保存
严格分区操作(样品处理、试剂配制、加样)
实验后需对工作台和移液器进行消毒处理
所有废弃物应按生物危害物处理
局限性说明
检测结果可能受以下因素影响：
样品收集、处理及保存条件
交叉污染可能导致假阳性
病原体基因变异可能导致假阴性
不同提取方法效率差异
本产品仅限科研用途，如需确诊请结合其他检测方法。
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