产品概述
本试剂盒采用TaqMan探针荧光定量PCR核心技术，针对制草乌（Aconitum kusnezoffii Reichb. 炮制加工品）特异性基因片段精准设计引物与探针，可快速、特异、灵敏地定性与定量检测各类样品中的制草乌核酸，有效区分制草乌与乌头属其他近缘物种（如川乌、草乌生品、附子等）及常见混淆中药材，为制草乌药材真伪鉴别、掺伪排查、炮制质量控制及科研检测提供标准化分子生物学解决方案，仅用于科研用途。
产品名称 | 制草乌探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Aconitum kusnezoffii Preparata Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4909 |
产品特点
高灵敏度与特异性：引物及探针针对制草乌特异性基因序列设计，避免与其他物种交叉反应。
双重检测功能：支持定性与定量分析，定量线性范围达5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。
即用型设计：预混缓冲液与酶混合物，用户仅需提供DNA模板。
质控完善：含阳性对照（无传染性DNA片段）及阴性对照，确保结果可靠性。
实验流程
标准曲线制备（定量分析需执行）
标记6管，依次加入45μL专用稀释液，梯度稀释阳性对照（10^7拷贝/μL起始），获得10^6–10^1拷贝/μL系列浓度标准品。
每步稀释需更换枪头，冰上静置备用。
样品DNA提取
建议设置阴性（NC，水）和阳性对照（PC，阳性对照1000倍稀释液）。
兼容多数商业DNA提取试剂盒，提取后需测定浓度及纯度（A260/A280≈1.8–2.0）。
qPCR反应体系（20μL/管）
| 组分 | 体积（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 1 |
| 引物-探针干粉（复溶）| 2 |
| DNA模板 | 2 |
| 无核酸酶水 | 5 |
PCR程序（需优化仪器参数）
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 10 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 60 sec | 40 |
| 信号采集 | FAM通道（淬灭基团：NFQ） |
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样品浓度。
定性检测：
阳性：Ct≤39，且有典型扩增曲线；
阴性：Ct≥40；
灰区（39<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。
质控要求：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤39，否则实验无效。
防污染措施：使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面。
局限性：
基因突变可能导致假阴性；
提取效率差异或运输不当可能影响结果准确性。
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关键字： 制草乌;探针法;PCR鉴定试剂盒;