元胡探针法PCR鉴定试剂盒

产品原理

基于实时荧光定量PCR技术（探针法），通过Taq酶的5'核酸外切酶活性切割与靶序列结合的荧光标记探针。探针5'端标记报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，扩增时探针被切割导致荧光信号释放，通过检测荧光强度实现定量/定性分析。

产品特点

高灵敏性：引物与探针针对元胡高度保守区设计，特异性强，无交叉反应。

即开即用：用户仅需提供样品RNA/DNA模板。

内置对照：含阳性对照（无传染性DNA片段，1×10^8拷贝/μL），便于区分假阴性。

双重用途：支持定量检测（线性范围5-7个数量级）及定性分析。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |

| 酶混合液 | 100 μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 引物混合液 | 100 μL |

| 荧光探针 | 50 μL |

| 阳性对照 | 50 μL (1×10^8拷贝/μL) |

| 说明书 | 1份 |

实验步骤

1. 标准曲线制备（以10^1-10^7拷贝/μL为例）

标记6管，依次稀释阳性对照（10倍梯度），冰上保存备用。

2. 样品制备

提取待测RNA/DNA（推荐柱式提取法），设置阴性/阳性对照。

3. PCR反应体系（20 μL/管）

| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 荧光探针 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 样品模板 | 5 μL | - | - |

| 标准品稀释液 | - | - | 5 μL |

| 超纯水 | - | 5 μL | - |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增循环（40次） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线明显起峰；

阴性：Ct ≥ 40；

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

操作需分区进行，避免污染。

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融。

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