检测原理
基于实时荧光定量PCR技术（探针法），通过Taq酶的5'→3'核酸外切酶活性切割探针，释放荧光信号。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，扩增过程中荧光强度与靶序列含量成正比，实现定量/定性分析。
产品名称 | 茵陈探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Herba Artemisiae Scopariae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4922 |
产品特点
高灵敏度：优化引物与探针，检测限低至10拷贝/μL。
特异性强：靶向茵陈高度保守序列，无交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供RNA模板。
内控设计：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL），区分假阴性。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 | 功能说明 |
| qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶、Taq酶等 |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 标准品梯度稀释 |
| 引物混合液 | 100μL | 特异性扩增茵陈靶序列 |
| 探针 | 50μL | 标记荧光基团与淬灭基团 |
| 阳性对照 | 50μL (10^8拷贝/μL) | 质控标准品 |
操作步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。
2. RNA提取
建议使用柱式RNA提取试剂盒，设置阴性/阳性对照（N+2样本）。
3. qRT-PCR反应
反应体系（20μL）：
缓冲液10μL + 酶混合液2μL + 探针1μL + 引物2μL + 模板RNA 5μL。
反应程序：
逆转录：50℃ 30 min → 预变性：94℃ 10 min → 40循环（94℃ 15 sec，60℃ 1 min，荧光采集）。
4. 数据分析
定量：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性：Ct≤35为阳性，≥40为阴性；36~40需复测。
注意事项
分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免交叉污染。
使用带滤芯枪头，冰上操作。
阳性对照需最后加入，单独存放。
若重复实验无效，需检查试剂活性或重新设计引物。
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