香菇源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 香菇源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Shiitake Mushroom-derived Component Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4825 |
产品基本信息
规格：50次/盒（20μL或40μL反应体系）
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。
适用样本：香菇干货、菌粉、食用菌制品、调味品等。
产品特点
高特异性：针对香菇保守序列设计的引物与探针，避免与其他物种DNA交叉反应。
高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应（探针法）。
即开即用：预混MasterMix及优化引物-探针体系，用户仅需提供DNA模板。
质控完善：含阳性对照（1×10⁷拷贝/μL），支持标准曲线定量（线性范围≥5个数量级）。
多功能性：支持定性与定量检测，适配常规荧光定量PCR仪。
试剂盒组成
核心组分：
2×Probe qPCR MasterMix
香菇源性成分特异性引物-探针干粉
荧光PCR专用模板稀释液
阳性对照（1×10⁷拷贝/μL）
超纯水（无核酸酶）
需自备试剂：样本DNA提取试剂、核酸纯化试剂盒、离心管及带滤芯吸头。
实验流程
样本DNA制备：
提取样本DNA，建议A260/A280纯度1.8-2.0。
标准曲线稀释（示例）：
将阳性对照按10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL），独立操作避免污染。
PCR反应体系：
按说明书配制20μL体系（含MasterMix、引物-探针、模板DNA）。
扩增程序：
预变性：95℃ 5分钟；扩增循环：95℃ 10秒→60℃ 30秒（40循环，采集荧光）。
结果分析：
定量：通过Ct值绘制标准曲线计算样本拷贝数。
定性：Ct≤36为阳性，≥40为阴性，36-40需复测。
注意事项
操作规范：
分区操作（样本制备、PCR配制、扩增区），使用带滤芯吸头。
避免反复冻融试剂，阳性对照单独存放。
应用限制：仅限科研用途，不可用于临床诊断或食品合规检测。
疑难处理：
无扩增样本建议稀释后复测，排除抑制剂干扰。
标准曲线R²需≥0.98，否则需重新标定。
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