放线菌属通用PCR试剂盒
Actinomyces spp.
产品及特点:
它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增放线菌属通用,与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次,但只能用于科研。
规格及成分:
编号
成分
规格
试剂一
PCR MagicMix 3.0
1 mL(红盖)
试剂二
超纯水
1 mL(亮黄色)
试剂三
放线菌属通用PCR 引物混合液
100 μL(白盖)
试剂四
放线菌属通用 PCR 阳性对照
(1×10E8 拷贝/μL)
50 μL(黄盖)
试剂五
使用手册
1 份
运输及保存: 低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
自备试剂: 样品 DNA。
使用方法 一、样品 DNA 的制备:
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品,则需要做N+2个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL 鲍肌肉萎缩症病毒 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系):
3. 对N+2个样品,在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照,故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分:
成份
N+2 个
样品管
PCR 阴性
对照
PCR 阳性
PCR Magic Mix 3.0
各 20μL
20μL
鲍肌肉萎缩症病毒
PCR 引物混合液
各2μL
2μL
N+2个样品
DNA模板
各18μL
--
PCR 阴性对照(水)
18μL
PCR 阳性对照(放线菌属通用 PCR阳性对照1000倍稀释液)
4. 按下表设置 PCR 反应:
过程
温度
时间
预变性
95℃
5 min
PCR 反应
(35 个循环)
30 sec
55℃
72℃
40 sec
最后延伸
7 min
三、电泳检测:
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实 验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
本产品仅供科研使用.请勿用于医药,不能用于临床治疗诊断使用!
上海钰博生物科技有限公司
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陈环环