酸性磷酸酶（ACP）测试盒 新品

酸性磷酸酶（ACP）测试盒

测定意义与原理

测定意义

酸性磷酸酶（ACP）是一种广泛分布于人体各组织中的水解酶，其测定具有重要的临床和科研价值：临床诊断：诊断和监测前列腺癌、乳腺癌、骨肿瘤等疾病疾病监测：评估肝病、肾病、溶血性疾病等的病情变化生物学研究：了解细胞代谢和信号传导途径农业研究：研究植物抗逆机制和品质改良食品检测：评估食品的新鲜度和营养价值

测定原理

ACP在酸性条件下（pH4.8-5.0）催化底物α-萘磷酸钠水解生成α-萘酚，α-萘酚与固蓝B盐反应生成稳定的有色复合物，在405nm波长处有特征吸收峰，通过测定吸光度可计算ACP活性。反应式如下： α-萘磷酸钠→ACP,酸性条件α-萘酚+磷酸钠α-萘磷酸钠ACP,酸性条件α-萘酚+磷酸钠 α-萘酚+固蓝B盐→有色复合物α-萘酚+固蓝B盐→有色复合物

试剂盒组成

比色法试剂盒

组分 规格 作用说明

缓冲液 液体60mL×1瓶 含柠檬酸盐缓冲液（pH4.8），用于提供酸性反应条件

底物液 液体6mL×1瓶 含α-萘磷酸钠溶液，反应底物

显色剂 液体6mL×1瓶 含固蓝B盐溶液，显色剂

标准品 液体1mL×1支 含α-萘酚标准品，用于建立标准曲线

ELISA法试剂盒

组分 规格 作用说明

包被板 96孔×1块 预包被抗ACP单克隆抗体

酶标抗体 液体6mL×1瓶 含HRP标记抗ACP抗体

标准品 液体1mL×6管 含0、2、4、8、16、32、64U/L ACP标准品

样本稀释液 10mL×1瓶 用于稀释样本和标准品

显色剂A液 6mL×1瓶 含过氧化氢溶液

显色剂B液 6mL×1瓶 含TMB溶液

终止液 6mL×1瓶 含硫酸溶液

20倍浓缩洗涤液 20mL×1瓶 用于洗涤酶标板

自备仪器与试剂

必备仪器

比色法/微量法：可见光分光光度计/酶标仪（405nm检测通道）、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

ELISA法：酶标仪（450nm检测通道）、96孔板、37℃恒温箱、洗板机

通用：低温离心机（≥10000g）、恒温水浴锅、可调式移液器、电子天平

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、三氯乙酸

样本前处理方法

动植物组织样本取样：称取约0.1g组织，用蒸馏水洗净表面杂质，用滤纸吸干匀浆：按照组织质量(g):缓冲液体积(mL)为1:5~10的比例进行冰浴匀浆离心：10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测稀释：若ACP活性过高，用缓冲液稀释1-10倍后测定

细胞样本收集：收集1×10⁶细胞，加入1mL缓冲液破碎：冰浴超声波破碎（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）离心：10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

血清/尿液样本血清：直接测定；若浓度过高，用缓冲液稀释10-20倍尿液：离心去除沉淀，取上清液测定；或用缓冲液稀释10-20倍

测定操作步骤

比色法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至405nm，蒸馏水调零标准曲线绘制：

将标准品稀释成0、10、20、30、40、50μmol/L系列浓度

取1mL标准溶液于比色管中，加入1mL显色剂，混匀

室温反应15min，测定405nm波长下的吸光度，绘制标准曲线样品测定：

取1mL样品溶液，加入1mL底物液，混匀

37℃水浴反应30min，加入1mL显色剂，混匀

室温反应15min，测定405nm波长下的吸光度

根据标准曲线计算样品中ACP活性

ELISA法操作试剂准备：

将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

标准品按说明书稀释成0、2、4、8、16、32、64U/L系列浓度加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加温育：

除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔

37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：

弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：

每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：

每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度

结果计算方法

单位定义

U/mg prot：每毫克组织蛋白每分钟催化生成1μmol产物的酶量

U/g 鲜重：每克鲜重样本每分钟催化生成1μmol产物的酶量

U/L：每升样本每分钟催化生成1μmol产物的酶量

比色法计算公式

ACP活性(U/mg prot)=(A测定−A空白)×C标×V总(A标准−A空白)×Cpr×W×TACP活性(U/mg prot)=(A标准−A空白)×Cpr×W×T(A测定−A空白)×C标×V总

A测定：样本管吸光度值

A空白：空白管吸光度值

A标准：标准管吸光度值

C标：标准品浓度（μmol/mL）

V总：样本提取液总体积（mL）

Cpr：样本蛋白浓度（mg/mL）

W：样本质量（g）

T：反应时间（min）

ELISA法计算公式

ACP含量(U/L)=样本OD值−空白OD值标准品OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数ACP含量(U/L)=标准品OD值−空白OD值样本OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数

性能指标

指标 比色法 ELISA法 HPLC法

线性范围 0~50U/L 0~64U/L 0~100U/L

最低检测限 ≤0.1U/L ≤0.1U/L ≤0.01U/L

回收率 90%~110% 90%~110% 95%~105%

批内精密度 CV≤5.0% CV≤10% CV≤2.0%

批间精密度 CV≤8.0% CV≤15% CV≤3.0%

稳定性 2-8℃保存12个月 2-8℃保存6个月 2-8℃保存12个月

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免ACP失活；-20℃可保存3个月

植物组织需迅速处理，避免ACP氧化

液体样本需避免溶血和细菌污染

试剂使用：

底物液需避光保存，避免分解失效

ELISA法试剂需避免反复冻融，用后立即放回2-8℃保存

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

比色法反应温度需严格控制在37℃，反应时间30分钟

ELISA法需严格控制温育时间和温度，避免影响显色反应

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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