商品属性
产品名称 | 铜蓝蛋白（Cp）含量测试盒 | 产品货号 | BH-961163 |
规格 | 100管/48样、50管/24样 | 产品分类 | 氧化与抗氧化系列 |
测试方法 | 微量法、可见分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
铜蓝蛋白（Cp，Ceruloplasmin）是一种含铜的α₂-糖蛋白，主要功能包括：铜转运：负责将肝脏合成的铜转运到全身各组织，维持铜代谢平衡抗氧化作用：具有氧化酶活性，参与铁离子的氧化，防止铁在组织中沉积临床诊断：Wilson病（肝豆状核变性）患者血清铜蓝蛋白显著降低，是该病的重要诊断指标炎症反应：作为急性期反应蛋白，感染、炎症、肿瘤等疾病时血清铜蓝蛋白升高
测定原理
采用分光光度法，铜蓝蛋白催化3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）氧化生成蓝色产物，在645nm处有特征吸收峰，吸光度与铜蓝蛋白含量成正比： TMB+O2+H2O→Cp氧化型TMB(蓝色)+H2O2TMB+O2+H2OCp氧化型TMB(蓝色)+H2O2
试剂盒组成
组分 规格 作用说明
试剂一 液体25mL×1瓶 含0.1mol/L磷酸盐缓冲液，pH7.4，用于反应体系构建
试剂二 液体10mL×1瓶 含3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）溶液，反应底物
试剂三 液体100mL×1瓶 含0.1mol/L磷酸盐缓冲液，pH7.4，用于样本提取
试剂四 液体50mL×1瓶 含20%三氯乙酸（TCA）溶液，用于蛋白质沉淀
标准品 液体1mL×1支 含100mg/L铜蓝蛋白标准品，用于建立标准曲线
自备仪器与试剂
必备仪器
分光光度法：可见分光光度计、台式高速离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、漩涡混匀器
ELISA法：酶标仪、洗板机、恒温培养箱
通用：-20℃冰箱、电子天平、恒温水浴锅
必备耗材
离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器
自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、抗凝剂（肝素/EDTA）
样本前处理方法
动植物组织样本取新鲜组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分按质量(g):提取液(mL)=1:5~10比例（建议0.1g组织加1mL提取液）冰浴匀浆8000g 4℃离心15min，取上清置冰上待测若铜蓝蛋白含量过高，可用提取液稀释1-5倍测定
细胞/细菌样本收集对数生长期细胞/细菌，8000g 4℃离心5min弃上清按照细胞数量(10⁴个):提取液体积(mL)=500~1000:1的比例加入提取液（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）8000g 4℃离心15min，取上清置冰上待测
血清/血浆样本血清样本：血液凝固后3000g 4℃离心10min，取上清直接测定血浆样本：加入肝素/EDTA抗凝后，3000g 4℃离心10min，取上清直接测定若铜蓝蛋白含量过高，可用生理盐水稀释1-5倍测定
测定操作步骤
分光光度法操作
试剂准备：
试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存
试剂三：液体100mL×1瓶，4℃保存
标准品：用生理盐水稀释成0、20、40、60、80、100mg/L的标准系列
反应启动：
取比色管，依次加入工作液950μL + 样本/标准品50μL
立即混匀，37℃水浴反应15min
加入1mol/L硫酸溶液500μL终止反应
吸光度测定：
分光光度计预热30min，调节波长到645nm，用蒸馏水调零
测定各管吸光度值（A样、A标、A空）
ELISA法操作
包被与封闭：
用包被缓冲液稀释抗-Cp抗体至合适浓度，加入酶标板孔中，4℃过夜
弃去孔内液体，用洗涤液洗板3次，每次3min
加入封闭液，37℃孵育1h，弃去封闭液，洗板3次
加样与反应：
加入稀释后的样本和标准品，37℃孵育1h
弃去孔内液体，洗板3次
加入酶标记的抗-Cp抗体，37℃孵育1h
弃去孔内液体，洗板3次
显色与测定：
加入TMB底物溶液，37℃避光反应15min
加入终止液，立即在450nm波长下测定吸光度值
结果计算方法
单位定义
mg/L：每升样本中铜蓝蛋白的含量
mg/g鲜重：每克组织鲜重中铜蓝蛋白的含量
分光光度法计算公式
Cp含量(mg/L)=(A样−A空)×C标(A标−A空标)Cp含量(mg/L)=(A标−A空标)(A样−A空)×C标
A样-A空：样本扣除空白后的吸光度值
A标-A空标：标准品扣除空白后的吸光度值
C标：标准品浓度（mg/L）
简化公式
按鲜重计算：Cp（mg/g鲜重）= 10×(A样-A空)÷W
按液体体积计算：Cp（mg/L）= 10×(A样-A空)
ELISA法计算以标准品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线根据样本吸光度值在标准曲线上查得铜蓝蛋白含量
性能指标
指标 要求
线性范围 0~100mg/L，线性相关系数r≥0.995
最低检测限 ≤0.1mg/L
回收率 90%~110%
批内精密度 CV≤5.0%
批间精密度 CV≤8.0%
稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%
注意事项
样本处理：
血清样本应避免溶血，溶血会导致结果偏高
样本需新鲜制备，-80℃可保存6个月
样本处理过程中需避免接触铜器，防止铜污染
试剂使用：
TMB溶液对光敏感，配制后需避光保存
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
标准品需现配现用，避免分解
测定过程：
反应温度需严格控制在37℃
若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定
每个样本需设置至少3个平行实验，结果取平均值
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
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