商品属性
产品名称 | 谷氨酰胺酶（GLS)测试盒 | 产品货号 | BH-961191 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 产品分类 | 氮代谢系列 |
测试方法 | 微量法、可见分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
谷氨酰胺酶（GLS）广泛存在于高等动物、细菌和植物根中，其测定具有重要的生理和临床意义：生理研究：在氮代谢中具有重要调控作用，调节游离氨含量和尿素代谢临床诊断：作为肝病、肾损伤等疾病的生物标志物肿瘤研究：参与肿瘤细胞能量代谢，是肿瘤治疗的潜在靶点食品科学：评估食品中谷氨酰胺的含量和营养价值环境保护：监测土壤和水体中氮素的转化和循环
测定原理
GLS催化谷氨酰胺水解生成L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性；或通过偶联谷氨酸脱氢酶反应，测定NADH的消耗速率，反映谷氨酰胺酶活性。 谷氨酰胺+H2O→GLS谷氨酸+NH3谷氨酰胺+H2OGLS谷氨酸+NH3
试剂盒组成
组分 规格 作用说明
试剂A 液体50mL×1瓶 含0.1mol/L pH8.0 Tris-HCl缓冲液，提供酶促反应环境
试剂B 粉剂×1瓶 含谷氨酰胺底物，需临用前加入10mL蒸馏水溶解
试剂C 液体10mL×1瓶 含奈氏试剂，显色反应试剂
试剂D 液体10mL×1瓶 含标准氨溶液，用于建立标准曲线
试剂E 液体10mL×1瓶 含终止液，终止酶促反应
自备仪器与试剂
必备仪器
分光光度法：可见分光光度计（420nm检测通道）、1mL玻璃比色皿
微量法：酶标仪（420nm检测通道）、96孔板
通用：低温离心机（≥8000g）、恒温水浴锅、可调式移液器、研钵/组织匀浆器
必备耗材
离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、手术剪/镊子
自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水
样本前处理方法
动植物组织样本新鲜组织：准确称取0.1g植物组织，加入1mL提取液，冰浴匀浆细胞样本：收集500万细胞，加入1mL提取液，冰浴超声波破碎离心处理：12000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测样本稀释：若酶活性过高，用提取液稀释1-10倍后测定
土壤样本取土样：取5-10g新鲜土样，过2mm筛，去除石块和植物残体提取：加入5mL提取液，振荡30min，3000g离心10min过滤：取上清液用0.45μm滤膜过滤，滤液即为酶提取液保存：立即测定或-20℃保存3个月
测定操作步骤
分光光度法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零酶促反应：
取比色管，加入样本0.5mL + 试剂B 0.2mL，混匀
37℃水浴反应30min，加入试剂E 0.2mL终止反应
空白对照：取样本0.5mL + 提取液0.2mL，同样处理显色反应：
向各管加入试剂C 0.5mL，混匀，室温放置10min
在420nm波长下测定各管吸光度
以空白管调零，读取样本管吸光度值
微量法操作工作液配制：取试剂A 9mL + 试剂B 0.5mL + 试剂C 0.5mL，混匀样本测定：
取96孔板，加入样本20μL + 工作液180μL，混匀
37℃恒温孵育30min，酶标仪420nm波长下测定吸光度
空白对照：取提取液20μL + 工作液180μL，同样处理结果计算：ΔA = A样本 - A空白
结果计算方法
单位定义
U/g 鲜重：每克组织每分钟催化产生1μmol氨的酶量
U/L：每毫升样本每分钟催化产生1μmol氨的酶量
U/mg 蛋白：每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol氨的酶量
计算公式
GLS酶活性(U/g鲜重)=(A样−A空)×C标×V总(A标−A空标)×t×WGLS酶活性(U/g鲜重)=(A标−A空标)×t×W(A样−A空)×C标×V总
A样-A空：样本扣除空白后的吸光度值
C标：标准品浓度（μmol/mL）
V总：样本提取液总体积（mL）
A标-A空标：标准品扣除空白后的吸光度值
t：反应时间（min）
W：样本质量（g）
简化公式
按鲜重计算：GLS酶活性 = (A样-A空)/(A标-A空标) × C标 × V总/(t × W)
按蛋白计算：GLS酶活性 = (A样-A空)/(A标-A空标) × C标 × V总/(t × mgprot)
性能指标
指标 要求
线性范围 0~20μmol/L氨，线性相关系数r≥0.995
最低检测限 ≤0.01U/g鲜重
回收率 90%~110%
批内精密度 CV≤5.0%
批间精密度 CV≤8.0%
稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，避免酶活性失活；-20℃可保存3个月
酶提取液需用pH8.0 Tris-HCl缓冲液，避免过酸或过碱影响酶活性
样本处理过程中需避免高温和光照，防止酶活性降低
试剂使用：
奈氏试剂需现配现用，避免分解
谷氨酰胺底物需临用前配制，避免失活
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
测定过程：
反应温度需严格控制在37℃，反应时间30min
显色反应后需立即测定，2小时后吸光度值会下降
若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
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