α葡萄糖苷酶(α GC)测试盒
基本信息
测定意义:α-GC(EC3.2.1.20)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化水解芳基或烃基与糖基之间的α-糖苷键生成葡萄糖,不仅与细胞壁的松弛或加固有关,而且与细胞识别和一些信号分子产生密切相关。
测定原理:α-GC分解对-硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷生成对-硝基酚,后者在400nm有吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算α-GC活性。
检测方法:可见分光光度法、微量法
产品规格:50管/24样、100管/48样
保存条件:2-8℃(频繁使用时),-20℃(长时间不用时)
有效期:6个月(4℃);12个月(-20℃)
应用范围:科研用检测试剂,可测动物血清(浆)、组织、各种体液、灌流液、各种培养细胞以及细胞培养上清液等,部分试剂盒适用于检测植物和土壤。
产品优点
快速简便:操作时间短,48-50T可测40例样本左右,96-100T可测80例样本左右。
取样量微:常规操作取样量50μL,酶标仪操作仅需5μL即可检测。
稳定性好:试剂盒2~8℃存放3个月有效。
再现性好:20倍稀释线性仍然良好。
回收试验:X=99%。
受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
测试面广:可测多种样本类型,部分试剂盒适用于检测植物和土壤。
样本处理及要求
血清/血浆
血清:用无菌管收集,室温血液自然凝固10-20分钟,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
血浆:根据标本要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,同上述条件离心取上清。
尿液/体液
用无菌管收集尿液、胸腹水、脑脊液、唾液等样本,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
细胞培养上清/牛奶/蜂蜜
用无菌管收集样本,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
细菌、细胞或组织样品
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(10⁴个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织样品:称取适量组织样本,加入1mL提取液进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
土壤样品
需使用专用的土壤α-葡萄糖苷酶测试盒,具体样本处理方法请参照对应试剂盒说明书。
操作步骤
试剂准备:将试剂盒从冷藏环境中取出,在室温平衡15-30分钟后方可使用。
样本加样:按照试剂盒说明书要求,将样本和试剂加入对应反应孔中。
温育反应:在规定温度和时间内进行温育反应。
终止反应:加入终止液终止反应。
检测读数:使用酶标仪在规定波长下测定吸光度值。
注意事项
酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第1孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
底物A易挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
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