人外周血单个核细胞
产品信息:
产品名称 人外周血单个核细胞
组织来源 外周血
种属 人
产品规格 5×10^5Cells/T25
英文名称 | Human Peripheral Blood Mononuclear Cells | 规格 | 5×105 |
细胞形态 | 圆形 | 货号 | P-X1451 |
培养信息:
方法简介:实验室分离的人外周血单个核细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测:实验室分离的人外周血单个核细胞,不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称:人外周血单个核细胞
英文简称:PBMCs,PBMC
组织来源:外周血
产品规格:5×10⁵Cells/T25培养瓶
培养信息:包被条件
培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:半贴壁半悬浮
细胞形态:圆形
传代特性:不增殖;不传代
消化液:0.25%胰蛋白酶人外周血单个核细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞简介 :
人外周血单个核细胞分离自外周血;外周血是除骨髓之外的血液,临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中,再在从血液中提取分离得到造血干细胞,我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞,在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念。外周血单个核细胞(PBMC)即外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞和单核细胞。目前,主要的分离方法是密度梯度离心法,因为血液中各有形成分的比重存在差异,因此得以分离出不同的细胞。
原代细胞接种:
细胞计数与密度调整
使用血球计数板或细胞计数仪准确计数,调整细胞密度至合适范围(不同细胞类型差异较大,一般为1×10⁵-1×10⁶cells/ml)
密度过低:细胞无法分泌足够的生长因子,难以存活;密度过高:细胞竞争营养物质,易出现接触抑制
培养基选择
优先使用原代细胞专用培养基,若使用通用培养基,需添加合适的生长因子、血清等补充成分(如成纤维细胞添加FGF,内皮细胞添加VEGF)
血清浓度:原代细胞培养血清浓度一般为10%-20%,部分特殊细胞(如神经细胞)需使用无血清培养基
培养环境控制
温度:哺乳动物细胞一般为37℃,鸟类细胞38.5℃,昆虫细胞27℃
CO₂浓度:大多数细胞需要5%CO₂,维持培养基pH在7.2-7.4之间
湿度:培养箱湿度保持在70%-80%,避免培养基蒸发过快
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原代细胞实验注意事项:
取材要快、要新鲜、全程无菌
组织离体时间越短越好,冰上操作,减少缺血损伤。
严格控制细胞代数
原代细胞只建议用 P0~P3,代数越高越容易分化、结果越不可靠。
接种密度宁高不低
原代细胞普遍怕稀,太稀不贴壁、不生长、容易凋亡。
消化是关键,宁轻勿重
胰酶 / 胶原酶只消化到细胞变圆就终止,过度消化必死一批。
吹打轻柔,避免机械损伤。
培养基和血清不要随便换批次
血清、基础培养基、添加因子固定厂家固定批次,换批次必须先预实验。
避免频繁折腾细胞
少开培养箱门,不反复观察、不反复拿进拿出,温度、pH 波动对原代杀伤极大。
关键字: 人外周血单个核细胞;圆形;贴壁;
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