PNOS基因核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

 产品介绍：

该试剂盒采用 PCR-荧光探针法（即 TaqMan qPCR），具有高特异性、高灵敏度的特点，适用于食品、饲料及农作物中的转基因成分筛查。

 �� 检测原理与目的

检测原理：基于 实时荧光定量 PCR（qPCR） 技术。试剂盒包含针对 pNOS 基因序列设计的特异性引物和 TaqMan 探针。在 PCR 扩增过程中，随着目标 DNA 的指数级扩增，探针被酶切降解，释放出荧光信号。仪器实时监测荧光信号的累积情况，通过 Ct 值 来判断样本中是否含有 pNOS 基因片段。

核心目的：用于检测样品中是否存在 pNOS（NOS 启动子） 序列。

初筛作用：NOS 启动子是转基因植物中常用的调控元件，检测出该序列通常意味着样品含有转基因成分。

定性/定量分析：可判断样品是否为转基因阳性，并可根据标准曲线估算转基因含量。

�� 产品核心参数与组成

项目  详细信息

检测方法  实时荧光定量 PCR (TaqMan 探针法)

检测靶标  pNOS 基因 (NOS 启动子)

产品规格  48T (即 48 次测试)

主要组分  2×qPCR Mix (含 dNTPs、Taq 酶、缓冲液)、引物探针混合液、

阳性对照 (PC) (含 pNOS 序列的质粒或 DNA)、阴性对照 (NC) (无菌水)

荧光通道  FAM 通道 (用于检测 pNOS)，部分试剂盒可能包含内源基因 VIC/HEX 通道

��️ 操作流程

该试剂盒的操作流程遵循标准的 qPCR 流程：

样本处理：提取待测样本（如农作物植株、米粉、面粉、豆制品、饲料等）的基因组 DNA。

试剂准备：在冰上将 2×qPCR Mix、引物探针混合液和 DNA 模板按说明书比例混合。

加样：将混合好的反应体系加入 96 孔板或 8 联管中，同时设置 阴性对照 和 阳性对照。

荧光 PCR 扩增：将反应体系放入荧光定量 PCR 仪中，设置反应程序（典型的两步法程序）：

预变性：95℃ 2-3 分钟

扩增循环：95℃ 15 秒 → 60℃ 30-60 秒 (采集荧光)，40 个循环。

结果分析：仪器自动分析扩增曲线和 Ct 值。

�� 结果判读标准

结果判读主要依据扩增曲线形态和 Ct 值（具体阈值请以说明书为准，通常为 35 或 40）：

结果类型  判读标准  解释

阳性 (+)  扩增曲线呈典型的“S”型，且 Ct 值 < 阈值 (如 35)。  样品中检测到 pNOS 基因片段，判定为 转基因阳性。

阴性 (-)  无 Ct 值，或 Ct 值 ≥ 阈值，曲线为直线或无指数增长期。  样品中未检测到 pNOS 基因片段，判定为 阴性。

无效  阳性对照 未出现扩增曲线，或 阴性对照 出现扩增曲线。  实验失败（可能存在试剂失效或污染），结果无效，需重做。

⚠️ 注意事项

防止污染：由于 qPCR 灵敏度极高，极易受气溶胶污染影响。建议实验分区操作（试剂准备区、样本制备区、扩增区），并使用带滤芯的枪头。

避光保存：反应液中的荧光探针成分对光敏感，试剂应 -20℃ 避光 保存，使用前避免长时间暴露在强光下。

内源基因检测：为了确保检测结果的准确性（排除假阴性），建议同时使用 植物内源基因检测试剂盒（如大豆 Lectin 基因、玉米 Zein 基因）对样本进行检测，以确认样本 DNA 提取成功且无 PCR 抑制物。

对照设置：每次检测必须严格设置阳性和阴性对照，以确保实验结果的准确性和可靠性。

公司正在出售的产品：

科研领域：

常规PCR试剂盒。

临床诊断：

探针法qPCR试剂盒（如牛白血病病毒，灵敏度100拷贝/反应）。

现场检测：

恒温扩增试剂盒（如LAMP法，90分钟出结果）