油菜内源基因核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

 产品介绍：

检测原理与目的

核心目的：作为过程质量控制工具。在检测转基因油菜时，它用于判断实验过程是否有效，从而排除“假阴性”结果。

场景：如果转基因检测结果为阴性，但内源基因检测为阳性，说明样本中确实含有油菜成分，但不含转基因成分。反之，如果内源基因也为阴性，则说明样本中不含油菜，或DNA提取/PCR扩增过程失败，此时转基因的阴性结果无效。

检测原理：基于实时荧光PCR（qPCR）技术，采用TaqMan荧光探针法。试剂盒针对油菜基因组中高度保守、稳定存在的内源基因设计特异性引物和探针。

常见靶基因：

PEP基因：编码磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶，是常用的油菜内源参照基因。

CruA基因：编码芥酸生物合成相关酶，为芸苔属作物特有。

HMG I/Y基因：编码高迁移率族蛋白。

�� 产品核心参数与组成

项目  详细信息

检测方法  实时荧光定量 PCR (TaqMan 探针法)

检测靶标  油菜内源基因 (如 PEP, CruA)

产品规格  48T 或 48T (即 48/50 次测试)

主要组分  PCR反应液 (含引物、探针)、热启动Taq酶、阳性对照 (油菜基因组DNA)、阴性对照 (无菌水)

��️ 操作流程

样本处理：提取待测样本（如油菜叶片、种子、饲料等）的基因组 DNA。

试剂准备：在冰上将PCR反应液和酶等组分按说明书比例混合，配制成预混液。

加样：将配制好的预混液分装到PCR管/板中，然后加入DNA模板，同时设置阳性和阴性对照。

荧光PCR扩增：将反应体系放入荧光定量PCR仪中，运行两步法程序（通常为95℃预变性，然后进行40个左右的95℃变性、60℃退火/延伸循环）。

结果分析：仪器自动根据荧光信号和Ct值判断结果。

�� 结果判读标准

结果类型  判读标准  解释

阳性 (+)  扩增曲线呈典型的“S”型，且 Ct 值 < 阈值 (如 35-40)。  样本中含有油菜成分，且DNA提取和PCR反应成功。

阴性 (-)  无 Ct 值，或 Ct 值 ≥ 阈值，曲线为直线或无指数增长期。  样本中不含有油菜成分，或DNA提取/PCR扩增失败。

无效  阳性对照未出现扩增曲线，或阴性对照出现扩增曲线。  实验失败（可能存在试剂失效或污染），结果无效，需重做。

⚠️ 注意事项

防止污染：由于qPCR灵敏度极高，建议实验分区操作（试剂准备区、样本制备区、扩增区），并使用带滤芯的枪头，避免气溶胶污染。

避光保存：反应液中的荧光探针成分对光敏感，试剂应 -20℃ 避光 保存。

配套使用：该试剂盒不能直接检测转基因成分，必须与转基因特异性检测试剂盒（如检测特定品系RT73的试剂盒）配套使用，才能得出准确的检测结论。

应用范围：主要用于科研、食品安全检测和转基因成分监控，通常仅供科研使用。

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实验操作规范

严格分区操作：试剂配制区、样本处理区、扩增区需物理隔离，防止气溶胶污染。

每次实验需设置阴性对照（无模板DNA）、阳性对照（已知PAT基因样本）及空白对照（仅缓冲液）。

加样时避免过量或不足，推荐低容量反应管以提高热传导率。

污染防控

定期监测实验室空气、加样枪及仪器表面污染，可通过擦拭采样后扩增验证。

扩增产物需在专用区域处理，避免开盖时形成气溶胶污染。