产品介绍:
检测原理与核心优势
该试剂盒采用的是恒温荧光检测技术(通常指LAMP或类似技术)。
核心原理:针对牛基因组中特有的保守核酸序列设计多组特异性引物。在恒温条件下(通常为63℃),利用链置换DNA聚合酶(如Bst酶)对目标片段进行扩增。随着DNA链的合成,副产物焦磷酸镁沉淀会不断增加,导致反应体系的荧光信号发生改变(如SYTO-9染料嵌合或pH值变化),仪器实时监测荧光信号的变化,从而实现对牛源性成分的定性检测。
产品名称 | 牛源性成分核酸检测试剂盒(恒温荧光法) | 货号 | AP3460 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 48T |
自动判读:仪器会根据荧光曲线的拐点(Threshold Time, Tt)自动判读结果,无需人工分析电泳图谱。
主要优势:
操作快速:整个检测过程(包括扩增和检测)通常仅需45-60分钟,无需反复升降温。
高灵敏度:检出限可达0.5%(相对于总DNA),能够检测出极低含量的牛源性成分。
设备简单:仅需恒温荧光检测仪(如Genie II, Dhelix等),无需昂贵的实时荧光定量PCR仪。
防污染:采用闭管检测,反应结束后无需开盖,直接在管内判读结果,大大降低了气溶胶污染的风险。
�� 产品性能指标
根据相关产品信息,该试剂盒通常具备以下指标:
指标项目 性能参数参考
检测范围 2×10³ ~ 1×10⁸ 拷贝/毫升 (Copies/mL)
最低检测限 0.5% (w/w)
反应时间 45 min
反应温度 63℃
适用仪器 Genie II, Dhelix 1610/3210, ESE Tube Scanner, Deaou-308c等恒温荧光检测仪
适用样本 肉及肉制品、饲料、生物制品、加工食品等。
�� 主要组分与储存
试剂盒通常包含以下组分(以48T规格为例):
A-牛源-I(反应液):含有dNTPs、缓冲液、Mg²⁺等。
B-牛源-I(酶液):含有Bst DNA聚合酶等。
C-牛源-I(荧光染料):显色液。
阴性对照 (NG-I):非牛源性DNA或水。
阳性对照 (PG-牛源-I):含有牛源性基因片段的质粒或标准DNA。
储存条件:所有组分应于 -20℃ 条件下避光保存,运输过程需使用干冰或冰袋。避免反复冻融,使用前需完全解冻并混匀。
�� 标准操作流程
样本处理与DNA提取
采集待检测的肌肉组织、饲料或食品样本。
使用CTAB法或商品化的基因组DNA提取试剂盒,提取样本的基因组DNA作为模板。
试剂准备
将试剂完全解冻,各组分在使用前需涡旋混匀,并瞬时离心。
计算所需反应管数量(待检样品数 + 阴性对照 + 阳性对照)。
反应体系配置
在冰上操作,按说明书比例配制反应体系(通常为25 μL)。
将配制好的反应液分装至0.2 mL PCR管中。
上机扩增与检测
将配置好的反应管放入恒温荧光检测仪中。
设置反应温度为63℃,反应时间为45 min。
仪器实时监测荧光信号变化,并自动判读结果。
结果判读
阳性:荧光曲线呈典型的“S”型增长,且Tt值(Threshold Time)≤ 45 min。
阴性:荧光曲线为直线或轻微斜线,无“S”型扩增曲线,或Tt值无定义。
⚠️ 注意事项
防止污染:实验应严格分区(试剂准备区、样本制备区、扩增区),避免气溶胶污染。
操作规范:试剂配制和加样步骤建议在冰上进行,避免酶活性损失。反应液对光敏感,应避光保存和使用。
质控要求:每次实验必须设置阴性对照(无模板)和阳性对照。若阴性对照出现阳性扩增或阳性对照无扩增,则本次实验结果无效。
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应用场景与产品选择建议
科研领域:
常规PCR试剂盒。
临床诊断:
探针法qPCR试剂盒(如牛白血病病毒,灵敏度100拷贝/反应)。
现场检测:
恒温扩增试剂盒(如LAMP法,90分钟出结果)
关键字: 牛;源性成分 ;核酸检测试剂盒;恒温荧光法;
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