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无酶消化液

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-K6020

产品活性：MCE iPSC/ESC 无酶消化液是一款基于化学螯合机制开发的、专用于诱导多能干细胞 (iPSC) 和胚胎干细胞 (ESC) 培养操作的无酶细胞解离试剂。可在 5-8 min 内高效完成 iPSC/ESC 的温和消化，适用于常规传代、消化及细胞团块处理等操作，稳定性和细胞状态保持效果显著优于传统方案。

描述及优势：MCE iPSC/ESC 无酶消化液是一款基于化学螯合机制开发的、专用于诱导多能干细胞 (iPSC) 和胚胎干细胞 (ESC) 培养操作的无酶细胞解离试剂。其核心作用机理是利用乙二酸类螯合剂温和破坏细胞间隙连接，从而实现细胞团块的有效分离。 本产品添加了碳酸氢盐、葡萄糖和 HEPES 等成分构建稳定的缓冲体系，维持适宜的 pH 环境；同时含有氯化钾、氯化钠等电解质以调节渗透压，使整体体系更接近胚胎微环境的生理条件。 本品可在 5-8 min 内高效完成 iPSC/ESC 的温和消化，适用于常规传代、消化及细胞团块处理等操作，稳定性和细胞状态保持效果显著优于传统方案。

操作流程：1. PSC 传代时机 当细胞汇合度达到约 85% 时即可进行传代，常规情况下每 4-8 d 传代一次。若细胞密度较低或分布不均匀，应根据细胞状态综合评估是否适合传代。 注：即使克隆团较小或汇合度不足，也不建议连续培养超过 10 d。 2. 传代比例调整 根据细胞生长状态和实验需求，按照 1:6-1:12 的比例进行传代。当细胞状态良好、克隆团大小均匀且汇合度约 85% 时，建议采用 1:12 传代。 注：”1:12” 表示将一个孔/瓶细胞分至 12 个孔 (以 6 孔板为例)。 3. 孔板准备 将预先以干细胞基底膜基质胶 (Cat. No.: HY-K6006) 包被的 6 孔板置于 37°C 培养箱孵育 1 h。 4. 培养基准备 根据接种孔数准备每孔 2 mL 的干细胞完全培养基。将 CEPT Cocktail Plus (1000×) (Cat. No.: HY-K6021) 按 1:1000 的比例加入到干细胞培养基 (Cat. No.: HY-K6501) 中，充分混匀配制干细胞完全培养基。使用前使其恢复至室温 (25°C)。 5. 细胞清洗 吸弃培养基上清，向每孔加入 2 mL DPBS (无钙镁, Cat. No.: HY-K3008)，轻柔混匀清洗细胞，再吸弃清洗液。 6. 细胞消化 每孔加入 2 mL 干细胞消化液 (Cat. No.: HY-K6020)，使其完全覆盖孔底。置于 37°C 培养箱中消化 5-7 min。 注：a. 建议消化 5 min 后镜下观察，若大部分细胞变圆变亮但未完全脱离基质，即可终止消化；若未见明显变化，可适当延长时间。 b. 为确保受热均匀，应使培养板与培养箱金属隔板直接接触，避免叠放。 7. 终止消化 消化完成后取出培养板，吸弃消化液。 8. 回收细胞 每孔加入 1-2 mL 预热的干细胞完全培养基，轻柔吹打 3 次，并以水平“十字法”轻摇混匀使细胞团块脱落。 注：a. 少量 (10-15%) 残留细胞未脱离基质属正常现象。 b. 为提高接种均匀性并减少机械损伤，建议将回收的细胞悬液转移至 1.5 mL 离心管中。 9. 处理预包被孔板 吸弃 6 孔板中的溶液，每孔加入 2 mL干细胞完全培养基。 10. 细胞接种 在孔板上标注细胞名称、代次、传代比例及日期。将消化后的细胞悬液轻柔混匀后按预设的传代比例均匀分配至各孔。 11. 铺板与培养 接种后以水平“十字法”轻摇混匀培养板 3 次，置于培养箱中过夜培养。 12. 换液 接种后 18-24 h 换液，随后每天换液一次。 13. 后续培养 传代 4-8 d 后根据细胞状态进行下一轮传代或冻存。

详情参考：https://www.medchemexpress.cn/inhibitor-kit/ipsc-esc-dissociation-solution-enzyme-free.html