检验原理:
乙型流感病毒Victoria系核酸检测试剂盒是一种基于实时荧光RT-PCR技术的体外诊断工具,专门用于检测和区分乙型流感病毒的Victoria谱系。
产品名称 | 乙型流感病毒 Victoria 系核酸检测试剂盒 |
产品分类 | 荧光PCR |
规格 | 50T |
货号 | AP3007 |
检测原理
本试剂盒采用实时荧光RT-PCR(逆转录-聚合酶链式反应)技术,通常基于TaqMan探针法。
逆转录 (RT):将样本中提取的病毒RNA逆转录为cDNA。
PCR扩增:使用针对乙型流感病毒Victoria系特异性基因序列(通常是血凝素HA或神经氨酸酶NA基因的保守区域)设计的引物和探针进行扩增。
荧光检测:反应体系中包含一条标记有荧光报告基团(如FAM)和淬灭基团的特异性探针。在扩增过程中,探针被Taq酶切断,释放荧光信号。
结果判定:仪器实时监测荧光信号。若样本中存在Victoria系病毒核酸,荧光信号会随扩增循环呈指数级增长,根据预设的阈值(Ct值)判定为阳性。
核心组成
试剂盒通常包含以下关键组分:
PCR反应液:包含dNTPs、反应缓冲液、特异性引物和荧光标记探针。
酶混合液:包含逆转录酶和热启动Taq DNA聚合酶。
阳性对照:含有目标基因片段的质粒或假病毒,用于验证试剂盒有效性。
阴性对照:不含模板的溶液,用于监控是否存在污染。
内对照 (部分试剂盒包含):用于监控样本采集质量及PCR反应是否存在抑制。
操作流程
样本采集:使用咽拭子、鼻拭子或肺泡灌洗液等呼吸道样本。
核酸提取:使用配套的核酸提取试剂盒(磁珠法或离心柱法)提取样本中的总RNA。
体系配置:将提取的RNA、PCR反应液和酶液按比例混合配制反应体系。
上机扩增:将反应管放入荧光定量PCR仪中,运行预设程序(通常包括42-50℃逆转录、95℃预变性及随后的40个循环扩增)。
结果分析:根据扩增曲线的形状和Ct值进行判定。
✨ 产品特点
高特异性:专门针对Victoria系设计,能有效区分乙型流感病毒的另一谱系——Yamagata系,避免交叉反应。
高灵敏度:最低检测限通常可达10³ copies/mL,能够检出低病毒载量的样本。
快速高效:整个检测过程(含提取)通常在2-3小时内完成。
操作简便:闭管检测,无需电泳,减少污染风险和操作步骤。
⚠️ 注意事项与储存
储存条件:试剂盒需在 -20℃ 条件下避光保存,避免反复冻融。
防止污染:必须严格分区操作(试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区),防止气溶胶污染导致假阳性。
样本质量:样本采集、运输和保存不当可能导致病毒RNA降解,造成假阴性结果。
结果解读:阴性结果不能完全排除感染,需结合临床症状和其他检测指标综合判断。
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注意事项:1、严防污染
分区操作:必须在独立的生物安全柜内进行样本处理、试剂配制和加样,避免气溶胶交叉污染。
专用耗材:使用无核酸酶的枪头、EP管等,建议使用带滤芯枪头。
规范操作:加样后立即盖紧管盖,避免试剂外溅。
2、保证质量
样本处理:样本采集后应立即冷藏(2-8℃),长期保存需置于-70℃以下,避免反复冻融^[历史回答]^。
试剂保存:严格按照说明书要求的温度(通常是-20℃或2-8℃)保存试剂,避免反复冻融。
对照设置:每次实验必须设置阳性对照、阴性对照和空白对照,监控实验有效性^[历史回答]^。
3、注意安全
生物安全:阳性样本需按生物安全三级标准处理,实验人员需佩戴个人防护装备(PPE)。
废弃物处理:所有废弃物(包括耗材、样本)需经121℃高压灭菌30分钟后方可丢弃^[历史回答
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