产品介绍:

H8亚型流感病毒核酸检测试剂盒是一种专门用于检测禽类及环境样本中H8亚型流感病毒核酸的分子诊断工具。该试剂盒基于实时荧光RT-PCR(逆转录-聚合酶链式反应)技术,具有高灵敏度和特异性。
产品名称 | H8 亚型流感病毒核酸检测试剂盒 | 货号 | AP3040 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 50T |
检测原理
该试剂盒通常采用双重荧光RT-PCR系统,设计思路如下:
双靶标检测系统:
H8-HA基因检测:针对H8亚型流感病毒的血凝素(HA)基因设计特异性引物和探针(通常标记FAM荧光素),用于确认样本中是否存在H8亚型病毒。
通用型A型流感检测(内参):针对所有A型流感病毒共有的保守基因(如M基因或NP基因)设计引物和探针(通常标记HEX/VIC荧光素),用于确认样本中是否存在A型流感病毒感染。
检测逻辑:只有当通用型A型流感检测呈阳性,且H8-HA基因检测也呈阳性时,才能判定为H8亚型流感病毒阳性。
核心组成

试剂盒(以50T规格为例)通常包含以下组分:
PCR反应液:含缓冲液、dNTPs、特异性引物和荧光标记探针。
酶混合液:含逆转录酶(RTase)和热启动Taq DNA聚合酶。
阳性对照:含有H8亚型目标基因片段的质粒或灭活病毒。
阴性对照:无核酸酶的水或缓冲液。
适用样本与操作流程

适用样本类型:
禽类样本:鸭、鹅等水禽的咽喉拭子、泄殖腔拭子。
环境样本:活禽市场、养殖场的污水、笼具涂抹物等。
标准操作流程:
样本采集与处理:采集拭子或环境样本,置于病毒保存液中。
病毒RNA提取:使用配套的病毒RNA提取试剂盒提取总RNA。
体系配置:将提取的RNA、PCR反应液和酶液按比例混合。
上机扩增:在荧光定量PCR仪上运行程序(通常包括逆转录、预变性和扩增循环)。
结果分析:根据扩增曲线的Ct值和荧光通道判定结果。
✨ 产品特点

特异性强:专门针对H8亚型设计,与其他流感病毒亚型(如H5、H7、H9)无交叉反应。
灵敏度高:最低检测限通常可达 1×10³ copies/mL,能够检出极低浓度的病毒。
双重保障:同时检测通用型A型流感和H8亚型,结果更可靠,且能监控样本质量。
应用明确:主要用于水禽(特别是鸭、鹅)的流感监测及野生动物疫病调查。
⚠️ 注意事项与储存
储存条件:试剂盒需在 -20℃ 条件下避光保存,避免反复冻融。
有效期:通常为12个月。
防污染:必须严格分区操作(试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区),防止气溶胶污染。
生物安全:H8亚型主要存在于野生水鸟,操作时需注意生物安全防护。
�� 应用意义

流行病学监测:用于监测野生水鸟和家禽中H8亚型流感病毒的流行情况。
生物安全评估:H8亚型虽主要感染禽类,但对其进行监测有助于评估其跨物种传播风险及病毒库的遗传变异情况。
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操作步骤:

整个流程遵循“样本处理 → 试剂配制 → 加样 → 上机检测 → 结果分析”的逻辑,核心是防污染和精准操作。
1. 样本处理 (核酸提取)
样本:鼻咽拭子、咽拭子或痰液样本。
裂解:将拭子浸入裂解液,充分混匀后室温静置10分钟。
提取:采用磁珠法或离心柱法提取总RNA,严格按照试剂盒说明书操作。
保存:洗脱后的RNA应立即使用或分装保存于-80℃。
2. 试剂配制与加样
反应体系准备:在试剂准备区配制Master Mix。根据待检测样本数计算总体积,通常按样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照的原则来配制。
推荐体系:例如,使用20μL体系的试剂盒,可包含qPCR预混液16μL、引物探针混合液4μL(具体体积请以实际说明书为准)。
分装:将配好的反应体系分装至PCR反应管中(如20μL/管)。
加样:在样本处理区,分别向反应管中加入5μL的模板RNA(样本、阳性质控、阴性质控)。盖紧管盖,短暂离心,避免污染和气泡。
3. 上机检测
运行程序:将反应管放入荧光定量PCR仪,运行预设程序。典型程序包括:
逆转录:50℃,15分钟(将RNA逆转录为cDNA)。
预变性:95℃,10分钟(激活Hot-Start Taq酶)。
扩增循环:通常为40个循环,每个循环包括变性(95℃,15秒) 和 退火/延伸(60℃,45秒),仪器在退火/延伸步骤同时采集荧光信号。
信号监测:仪器实时监测荧光信号变化,生成扩增曲线。
4. 结果分析与判定
Ct值:仪器根据荧光曲线自动计算阈值循环数(Ct值)。
结果判定:
阳性:样本Ct值 ≤ 37(具体阈值请以试剂盒说明书为准),且扩增曲线呈典型"S"型。
阴性:样本无Ct值或Ct值 > 40。
无效:阳性对照无Ct值或Ct值 > 35,或阴性对照有Ct值,需重新检测。
关键字: H8 ;亚型流感病毒;检测试剂盒;
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