产品介绍：
登革病毒通用型核酸检测试剂盒（Dengue Virus Universal/Nucleic Acid Detection Kit）是一种用于体外定性检测登革病毒（DENV）核酸的分子诊断产品。登革病毒分为1-4四个血清型，该试剂盒能够同时检测出这四种血清型，适用于登革热的早期辅助诊断。
产品名称 | 登革病毒通用型核酸检测试剂盒 | 货号 | AP3197 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 50T |
1. 检测原理
目前市面上的试剂盒主要基于实时荧光定量RT-PCR技术（Real-time RT-PCR）。
靶标区域： 针对登革病毒基因组中高度保守的区域（如5'非编码区或C基因区）设计特异性引物和探针。
技术原理： 采用一步法RT-PCR。首先将样本中的病毒RNA逆转录为cDNA，然后进行PCR扩增。
荧光检测： 通常使用TaqMan探针法。若样本中存在登革病毒RNA，扩增过程中会释放荧光信号（通常为FAM通道），仪器通过监测荧光信号的循环阈值（Ct值）来判断样本是否为阳性。
2. 产品特点
广谱性（通用型）： 能够同时检测登革病毒1、2、3、4型（DENV-1/2/3/4），避免因单一血清型检测导致的漏诊。
高特异性与灵敏度： 特异性强，通常不会与乙型流感、呼吸道合胞病毒（RSV）、寨卡病毒等其他病原体发生交叉反应；最低检测限通常可达 1×10³ copies/mL 或 1000 copies/mL。
早期诊断： 在患者感染早期（发病5天内，即病毒血症期）检测阳性率高，优于抗体检测（IgM/IgG）。
快速高效： 检测时间通常在 1.5 - 2 小时 左右，远快于病毒培养法（需3-7天）。
3. 主要用途
临床辅助诊断： 用于检测人血清、血浆或全血样本，辅助诊断登革热。适用于具有发热、头痛、肌肉关节痛等症状的疑似病例。
流行病学调查： 用于监测登革热的流行趋势和病毒分布。
媒介监测： 部分试剂盒也可用于检测蚊媒（如伊蚊）中的病毒，评估传播风险。
4. 储存与使用注意事项
储存条件： 试剂盒通常需要 -20℃ 避光保存（部分组分如Buffer可能在2-8℃保存，具体需参照说明书），避免反复冻融，有效期通常为6-12个月。
样本要求： 最佳检测窗口期为发病5天内。常用样本为急性期血清或血浆。
操作规范： 需在具备PCR检测资质的实验室进行，严格分区操作，防止气溶胶污染。
结果判读：
阳性： Ct值 < 38（不同厂家阈值略有差异），且扩增曲线呈典型“S”型。
阴性： 无Ct值或Ct值 ≥ 40。
可疑： 38 ≤ Ct值 < 40，建议复测或结合临床症状判断。
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操作步骤：
整个流程遵循“样本处理 → 试剂配制 → 加样 → 上机检测 → 结果分析”的逻辑，核心是防污染和精准操作。
1. 样本处理 (核酸提取)
样本：鼻咽拭子、咽拭子或痰液样本。
裂解：将拭子浸入裂解液，充分混匀后室温静置10分钟。
提取：采用磁珠法或离心柱法提取总RNA，严格按照试剂盒说明书操作。
保存：洗脱后的RNA应立即使用或分装保存于-80℃。
2. 试剂配制与加样
反应体系准备：在试剂准备区配制Master Mix。根据待检测样本数计算总体积，通常按样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照的原则来配制。
推荐体系：例如，使用20μL体系的试剂盒，可包含qPCR预混液16μL、引物探针混合液4μL（具体体积请以实际说明书为准）。
分装：将配好的反应体系分装至PCR反应管中（如20μL/管）。
加样：在样本处理区，分别向反应管中加入5μL的模板RNA（样本、阳性质控、阴性质控）。盖紧管盖，短暂离心，避免污染和气泡。
3. 上机检测
运行程序：将反应管放入荧光定量PCR仪，运行预设程序。典型程序包括：
逆转录：50℃，15分钟（将RNA逆转录为cDNA）。
预变性：95℃，10分钟（激活Hot-Start Taq酶）。
扩增循环：通常为40个循环，每个循环包括变性（95℃，15秒） 和 退火/延伸（60℃，45秒），仪器在退火/延伸步骤同时采集荧光信号。
信号监测：仪器实时监测荧光信号变化，生成扩增曲线。
4. 结果分析与判定
Ct值：仪器根据荧光曲线自动计算阈值循环数（Ct值）。
结果判定：
阳性：样本Ct值 ≤ 37（具体阈值请以试剂盒说明书为准），且扩增曲线呈典型"S"型。
阴性：样本无Ct值或Ct值 > 40。
无效：阳性对照无Ct值或Ct值 > 35，或阴性对照有Ct值，需重新检测。
关键字： 登革病毒通用型;核酸检测试剂盒;
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