河流弧菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 河流弧菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Vibrio fluvialis Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4525 |
产品概述
本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，专用于快速、高灵敏度检测河流弧菌（Vibrio fluvialis）的核酸。适用于科研领域，如环境样本、临床标本或食品微生物检测中的河流弧菌筛查。
产品组成
预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（如SYBR Green）
引物对：特异性扩增河流弧菌靶基因序列
阳性对照：河流弧菌标准DNA模板
阴性对照：无核酸酶水
使用说明书
技术参数
检测靶标：河流弧菌特异性基因（如16S rRNA或毒力基因）
灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的核酸
特异性：与近源弧菌（如霍乱弧菌、副溶血弧菌）无交叉反应
反应体系：50 μL/反应（推荐）
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月
实验步骤
1. 样本处理
DNA提取：使用商用DNA提取试剂盒或酚-氯仿法从样本（如粪便、水体）中提取核酸。
模板稀释：建议将DNA稀释至1–100 ng/μL，避免PCR抑制物干扰。
2. PCR反应体系配置
在冰上按以下比例配制反应混合液（以单次反应为例）：
| 组分 | 体积（μL） |
| 预混液（2×） | 25 |
| 正向引物（10 μM） | 1 |
| 反向引物（10 μM） | 1 |
| DNA模板 | 2–5 |
| 无核酸酶水 | 补足至50 |
注意事项：
避免反复冻融试剂，解冻后需涡旋混匀并短暂离心。
每批次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照。
3. PCR扩增程序
按以下参数设置荧光定量PCR仪：
预变性：95℃, 5 min
循环阶段（40个循环）：
变性：95℃, 30 sec
退火：58℃, 30 sec（温度需根据引物Tm值优化）
延伸：72℃, 30 sec
熔解曲线分析：72℃→95℃，每0.5℃采集荧光信号，验证扩增特异性。
数据分析
阈值设定：仪器软件自动或手动设定荧光信号阈值。
Ct值解读：Ct值≤35视为阳性，>35需结合熔解曲线判断（非特异性扩增需排除）。
质量控制
阴性对照：应无扩增曲线（Ct值=Undetected）。
阳性对照：Ct值需在预期范围内（如15–25）。
注意事项
实验需在无菌环境下操作，避免气溶胶污染。
试剂解冻后应置于冰上，使用后立即放回-20℃。
本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。
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