伽氏疏螺旋体（伽氏包柔螺旋体）染料法荧光定量PCR试剂盒

伽氏疏螺旋体（伽氏包柔螺旋体）染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检测原理

本试剂盒采用SYBR Green染料法荧光定量PCR技术，通过特异性引物扩增伽氏疏螺旋体的保守基因序列。SYBR Green染料可嵌入双链DNA中，在激发光下发出荧光信号，荧光强度与扩增产物量成正比，通过实时监测荧光信号实现定量分析。

产品特点

高灵敏度：最低检测限可达10^3拷贝/μL。

特异性强：引物针对伽氏疏螺旋体特有基因设计，避免交叉反应。

操作简便：预混反应体系，用户仅需加入模板DNA即可开始实验。

快速检测：全程耗时约1.5小时（含扩增与数据分析）。

质量控制：提供阳性对照（标准品）和阴性对照，确保结果可靠性。

试剂盒组成

| 组分名称 | 规格（50次） |

| 2×qPCR预混液（含SYBR Green） | 1 mL |

| 伽氏疏螺旋体特异性引物混合液 | 100 μL |

| 阳性对照（标准品） | 50 μL（10^6 copies/μL） |

| 阴性对照（无核酸水） | 1 mL |

| RNase-Free水 | 1 mL |

实验步骤

1. 样本准备

样本类型：全血、组织、脑脊液等。

核酸提取：建议使用柱式法或磁珠法提取DNA，纯度要求A260/A280为1.8~2.0。

2. PCR反应体系配制（每20 μL体系）

| 组分 | 体积 |

| 2×qPCR预混液 | 10 μL |

| 引物混合液 | 0.8 μL |

| 模板DNA | 2 μL |

| RNase-Free水 | 7.2 μL |

3. 扩增程序（需在荧光定量PCR仪上运行）

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15 s | |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 s | 40 |

| 熔解曲线分析 | 60~95℃ | 连续采集 | 1 |

4. 数据分析

Ct值判定：以阈值线（Threshold）超过背景荧光10倍时的循环数为Ct值。

定量方法：通过标准曲线计算样本中目标基因拷贝数。

注意事项

实验前需严格分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区），避免污染。

熔解曲线需为单一峰，若出现杂峰可能提示非特异性扩增。

试剂解冻后需涡旋混匀，避免反复冻融（超过3次可能影响性能）。

质量控制

阳性对照：Ct值≤30，熔解曲线符合预期。

阴性对照：无扩增曲线（Ct值≥40或无信号）。

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