牛型放线菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 牛型放线菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Actinomyces bovis Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4560 |
产品特点
即开即用：预混优化引物、酶及缓冲体系，用户仅需提供待测DNA模板。
高特异性：针对牛型放线菌保守序列设计引物，无交叉反应。
高灵敏度：检测下限可达数百拷贝/反应。
一管式检测：闭管操作减少气溶胶污染风险。
双重功能：支持定性与定量分析，定量线性范围覆盖5个数量级。
试剂盒组成
| 成分 | 包装规格 | 保存条件 |
| 2×qPCR MagicMix | 500 μL（棕色管）| -20℃避光 |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL（黄盖） | -20℃ |
| 牛型放线菌引物混合物 | 100 μL（白盖） | -20℃避光 |
| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL | -20℃ |
操作步骤
标准曲线制备
取6支离心管，标记为7至2号，每管加入45 μL模板稀释液。
7号管加入5 μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL），震荡混匀得1×10^7拷贝/μL标准品。
依次梯度稀释至2号管（1×10^2拷贝/μL），冰上保存备用。
样品DNA提取
使用兼容的核酸纯化方法提取待测样本DNA，建议设置阳性/阴性对照各1管（N+2样本量）。
qPCR反应体系（20μL）
若定量检测：设置N+9反应管（N+2样本+6标准曲线+1阴性对照）。
若定性检测：仅需4号标准品（1×10^4拷贝/μL）作为参照。
荧光定量PCR程序
预变性：95℃ 5分钟。
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光信号）。
溶解曲线分析（可选）：60℃~95℃逐步升温，验证扩增特异性。
注意事项
避免反复冻融试剂，溶解后短暂离心使用。
实验分区操作（样本制备区、PCR反应区），防止污染。
阳性对照需与待测样本分开存放，避免交叉污染。
质量控制
阴性对照：应无扩增曲线（Ct值≥40或无信号）。
阳性对照：Ct值≤30，且溶解曲线为单一峰。
标准曲线：相关系数R²≥0.98，扩增效率90%~110%。
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