副牛痘病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 副牛痘病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Paravaccinia Virus Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4583 |
产品特点
高特异性：引物针对副牛痘病毒保守区域设计，避免与其他病原体交叉反应。
灵敏检测：染料法（如SYBR Green I）实时监测扩增，灵敏度达10^2拷贝/μL。
操作简便：预混反应体系（含酶、dNTPs、缓冲液等），仅需加入模板和引物。
闭管防污染：一管式操作减少气溶胶污染风险。
内控优化：含ROX校正染料，兼容主流荧光定量PCR仪。
试剂盒组分
| 成分编号 | 组分名称 | 规格 |
| 1 | 2×qPCR Magic Mix（含染料） | 500 μL |
| 2 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |
| 3 | 副牛痘病毒qPCR引物混合液 | 100 μL |
| 4 | 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL |
| 5 | 使用手册 | 1份 |
注：需自备DNA模板、超纯水及10×ROX（依机型需求）。
实验流程
样本处理：提取待测样本RNA，逆转录为cDNA（若检测RNA病毒）。
阳性对照稀释：将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2-10^7拷贝/μL）制作标准曲线。
反应体系配制（20μL/反应）：
2×qPCR Magic Mix：10 μL
引物混合液：0.8 μL
cDNA模板：2 μL
超纯水：补至20 μL
PCR程序：
95℃ 预变性 3 min
95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec（40循环，荧光采集）
熔解曲线分析（可选）。
数据分析
阈值设定：取3-15循环荧光信号标准偏差的10倍作为基线。
结果判定：Ct值≤35且熔解曲线单一峰为阳性；无信号或Ct值＞35为阴性。
注意事项
避免反复冻融试剂，使用前充分混匀。
实验分区操作（试剂准备、样本处理、扩增区），防止污染。
熔解曲线需验证扩增特异性，排除非特异性产物。
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