产品用途
科研实验,用于三叉奥斯特线虫的定性或定量检测。
产品名称
三叉奥斯特线虫染料法荧光定量PCR试剂盒
英文名称
Ostertagia trifurcata Dye-based qPCR Kit
产品规格
50T
产品分类
荧光定量PCR
检测类型
PCR检测
产品货号
PR4422
技术原理
本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术,采用特异性引物和荧光染料检测目标DNA。荧光染料在不结合DNA时最大吸收波长为471 nm,结合DNA后最大吸收波长移至500 nm,发射光谱为530 nm。信号采集可在复性或延伸阶段进行。
实验操作
样本准备:
提取待测样本DNA,确保纯度符合PCR要求。
实验前1小时将试剂盒从-20℃取出,平衡至室温。
反应体系配制:
按推荐比例混合试剂、引物、荧光染料及模板DNA。
使用精确校准的移液器(误差≤2%),避免交叉污染。
PCR扩增程序:
预变性:95℃ 2分钟
循环阶段(40 cycles):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(信号采集)
数据采集与分析:
定量检测:以阳性对照浓度的对数(log值)为横轴,Ct值为纵轴绘制标准曲线,推算待测样本浓度。
定性检测:
阴性对照Ct值≥40;阳性对照Ct值≤30且呈现典型扩增曲线。
待测样本Ct值≤35判为阳性,≥40判为阴性;35<Ct<40需重复检测。
注意事项
实验全程需避光操作,避免荧光淬灭。
推荐使用双孔复孔以提高数据可靠性。
移液时避免产生气泡,枪头勿接触反应孔内液面。
疑难样本建议通过其他方法验证。
质量控制
试剂盒内含阳性对照,需符合Ct值≤30的标准。
若阴性对照出现扩增(Ct<40),实验需重新进行。
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